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IL-27試劑盒說明書
閱讀：1064 發(fā)布時間：2012-10-23人白介素-27（IL-27）ELISA試劑盒
（用于血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗人 IL-27 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 IL-27與單抗結合,，加入生物素化的抗人IL-27，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色,，zui后加終止液硫酸，在450nm處測OD值,，IL-27濃度與OD值成正比,，可通過繪制標準曲線求出標本中IL-27濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 標準品（Standards）：4ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| *抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清,、血漿（EDTA、檸檬酸鹽,、肝素抗凝）,、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測,，2-8℃保存48小時,；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融,。
2. 標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻,，配成4000pg/ml的溶液。設標準管8管,，每管加入標本稀釋液300ul,。在*管中加入4000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管,。如此反復作對倍稀釋,，從第七管中吸出300ul棄去。第八管為空白對照,。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,，向濾紙上印干,。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板：同前,。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘,。
6. 洗板：同前,。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻,。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算,。
2. 以標準品2000,、1000、500,、250,、125、62.5,、31.2,、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上作圖,，畫出標準曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應IL-27含量,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的IL-27 檢測濃度小于15pg/ml,。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的人IL-27。不與人其它細胞因子有交叉反應,。
3. 重復性：板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10％。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,，每次測定應同時做標準曲線,。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高,。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
5. 本試劑盒僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！