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絞股藍總皂苷對非酒精性脂肪肝大鼠 Treg/Th17 免疫功能的影響
阮丹,，雷婧(杭州市第三人民醫(yī)院，杭州 310000) 

摘要：目的 研究絞股藍總皂苷對非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,，NAFLD)大鼠肝臟保護作用及免疫調(diào)節(jié)作用機制,。方法 48 只 SD 大鼠隨機分為正常對照組，模型對照組,，多烯磷脂酰膽堿膠囊組(陽性對照組,，150 mg·kg?1)及絞股藍總皂苷高、中,、低(240,，120，60 mg·kg-1)劑量組,，除正常對照組外,，其余各組連續(xù)飼喂高脂飼料 10 周，制備NAFLD 模型,；模型成功后,，各組連續(xù)給藥 8 周。實驗期間,，分別于給藥 0,，4，8 周眼眶取血檢測血清 AST,、ALT,；末次給藥后，采用流式細胞技術檢測外周血 Th17 和 Treg 細胞含量,；酶聯(lián)免疫法檢測血清 IL-17,、IL-10 及 TNF-α 含量。HE染色檢查肝組織病理變化和免疫組化法檢查肝組織 IL-17 和 Foxp3 表達,。結果 給藥 4 周,，絞股藍總皂苷高劑量顯著降低大鼠血清 ALT、AST(P<0.01),；給藥 8 周,，絞股藍總皂苷各劑量均能顯著降低血清 ALT、AST(P<0.05,，0.01),。絞股藍總皂苷高、中劑量能改善肝組織病變,，降低 TNF-α 水平,；高劑量顯著降低 IL-17,、升高 IL-10 水平(P<0.05，0.01),，降低淋巴細胞 IL-17 含量,，升高 CD4+CD25+Treg 含量(P<0.05)，明顯減少炎癥因子 IL-17 的表達和增加 Foxp3 表達,。

結論 絞股藍總皂苷能改善 NAFLD 大鼠肝臟病變,，其作用機制可能與調(diào)節(jié)肝臟 Treg/Th17 細胞平衡，減少促炎癥因子和增加抗炎因子產(chǎn)生相關,。
關鍵詞：絞股藍總皂苷,；非酒精性脂肪肝；Treg/Th17 細胞,；炎癥因子
中圖分類號：R965.2 文獻標志碼：B 文章編號：1007-7693(2017)12-1683-06 

非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,，NAFLD)是指除酒精和其他明確的損肝因素所致的，以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征,，是脂肪肝主要類型,。NAFLD 在我國患病率高達 15%[1]；范圍的患病率高達 12.9~46%[2],。NAFLD 的發(fā)生發(fā)展是一個多因素作用的復雜過程,，除涉及脂質(zhì)過氧化、線粒體功能障礙,、炎性反應因子失平衡,、天然免疫等外，NAFLD 發(fā)病過程還存在免疫功能失衡,，表現(xiàn)為調(diào)節(jié)性 T 細胞(Treg)和輔助性 T 細胞 17(Th17)數(shù)目和功能的異常[3-4],。
絞股藍總皂苷是絞股藍 (Gynostemma pentaphyllum)主要有效成分群，含有 80 余種達瑪烷型四環(huán)三萜類人參皂苷類成分,。絞股藍總皂苷具有降脂保肝,、降血糖、降血壓,、增強免疫力等藥理作用[5-6],。研究發(fā)現(xiàn)，絞股藍總皂苷能夠調(diào)節(jié)機體 T 淋巴細胞亞群失調(diào)[7],；抑制 NAFLD 肝病大鼠肝臟脂肪變[8],。然而絞股藍總皂苷是否可通過免疫調(diào)節(jié)防治 NAFLD 及具體機制并不清楚。本實驗采用高脂飼料誘導 NAFLD 大鼠模型,，探討絞股藍總皂苷通過影響 Treg/Th17 細胞免疫功能，并從調(diào)節(jié)促/抗炎因子平衡途徑研究其防治 NAFLD 的作用機制,。
1 動物與試劑
1.1 動物及其飼料
48 只清潔級 SD 大鼠,，♂，體質(zhì)量 180~220 g，許可證號 SCXK(浙)20080033,，由浙江省醫(yī)學科學
院動物中心提供,。高脂飼料含普通飼料 75%、豬油 12%,、膽固醇 2%,、膽鹽 1%、蛋黃粉 10%,，購
于南通特洛菲飼料科技有限公司,，批號為TP28708U。
1.2 藥物
絞股藍總皂苷(南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司,，批號：ZL20160321RJ,，含量：80%)。多烯磷脂酰膽堿膠囊(賽諾菲,，批號：4JD036,，規(guī)格：每粒228 mg)。
1.3 試劑
CD4-FITC(貨號：11-0040-81),、CD25-PE(貨號：12-0390-80)及 IL-17-PE(貨號：12-7177-81)流式試劑均購于 eBioscience 公司,。白細胞介素 10(IL-10，批號：20161030),、白細胞介素 17(IL-17,，批號：20161015) 及腫瘤壞死因子 -α(TNF-α ，批號：20160928)酶聯(lián)免疫試劑盒購于上海恒遠生物科技有限公司,。IL-17(抗兔,，貨號：ab91649)和 Foxp3(抗小鼠，貨號：ab22510)購于 abcam 科技有限公司,。丙氨酸氨基轉移酶(ALT,，批號：16092401)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST,，批號：16092401)試劑盒均購于寧波美康生物科技股份有限公司,。蘇木素-伊紅染液(H&E，南京建成科技有限公司,，批號：20160806),。

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