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人白介素-18結(jié)合蛋白（IL-18BP）ELISA試劑盒
閱讀：809 發(fā)布時間：2014-10-30人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗人 IL-18BP 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 IL-18BP與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人IL-18BP，形成免疫復合物連接在板上,，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍色,，zui后加終止液硫酸,，在450nm處測OD值，IL-18BP濃度與OD值成正比,，可通過繪制標準曲線求出標本中IL-18BP濃度,。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
標準品（Standards）：4ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
*抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測,，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存,，避免反復凍融,。血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清至少作1：5稀釋（取50ul,，加標本稀釋液200ul,稀釋5倍）。
2. 標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻,，配成4000pg/ml的溶液。設標準管8管,，每管加入標本稀釋液300ul,。在*管中加入4000pg/ml的標準品溶液300ul混勻后用加樣器吸出300ul，移至第二管,。如此反復作對倍稀釋,，從第七管中吸出300ul棄去,。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul,，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,，向濾紙上印干,。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板：同前,。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘,。
6. 洗板：同前,。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗處反應15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻,。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算,。
2. 以標準品2000,、1000、500,、250,、125、62.5,、31.2,、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上作圖,，畫出標準曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應IL-18BP含量,，再乘上稀釋倍數(shù)即可,。
人白介素-18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的IL-18BP 檢測濃度小于15pg/ml。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的人IL-18BP,。不與人其它細胞因子有交叉反應,。
3. 重復性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于10.2％,。
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