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人α干擾素(IFN-α)酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：                                                          96T

1μg/L - 32μg/L

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中α干擾素(IFN-α)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人α干擾素(IFN-α)水平,。用純化的人α干擾素(IFN-α)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入α干擾素(IFN-α)，再與HRP標(biāo)記的α干擾素(IFN-α)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的α干擾素(IFN-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人α干擾素(IFN-α)濃度。 

試劑盒組成 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

• 32μg/L	5號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  16μg/L	4號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  8μg/L	3號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  4μg/L	2號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
  2μg/L	1號標(biāo)準(zhǔn)品	150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。 
• 溫育：操作同3,。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
• 加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
• 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
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