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兔p物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒的實驗原理
閱讀：881 發(fā)布時間：2013-7-19本試劑盒僅供研究使用。
兔p物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒使用目的：
本試劑盒用于測定兔血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中p物質(zhì)（SP）含量,。
兔p物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中兔p物質(zhì)（SP）水平。用純化的兔p物質(zhì)（SP）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入p物質(zhì)（SP），再與HRP標記的p物質(zhì)（SP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的p物質(zhì)（SP）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中兔p物質(zhì)（SP）濃度,。
兔p物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標準品（800ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
兔p物質(zhì)（SP）ELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
| 400ng/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 200ng/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 100ng/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 50ng/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 25ng/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：用封板膜封板后置
8. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。