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牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方
閱讀：2851 發(fā)布時(shí)間：2015-12-30實(shí)驗(yàn)方法原理
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用zui廣泛和zui普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，有時(shí)又稱(chēng)為普通培養(yǎng)基,。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的zui基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),，所以可供作微生物生長(zhǎng)繁殖之用,?；A(chǔ)培養(yǎng)基含有牛肉膏,、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏為微生物提供碳源,、能源,、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素,，而NaCI提供無(wú)機(jī)鹽,。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時(shí)溶化,，實(shí)際應(yīng)用時(shí),，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化，以免瓊脂燒焦,。瓊脂在40℃時(shí)凝固,，通常不被微生物分解利用。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同,。
由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌,，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性,，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是我司常見(jiàn)代理產(chǎn)品,，我司代理BD品牌培養(yǎng)基多年,，一直以的質(zhì)量贏得客戶(hù)的信賴(lài)與支持。本章上海恒遠(yuǎn)將為您具體解析牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：
牛肉膏：3.0 g
蛋白胨：10.0 g
NaCI：5.0 g
水：1 000 ml
pH：7.4-7.6
試劑,、試劑盒
牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸
儀器,、耗材
試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養(yǎng)基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號(hào)筆麻繩紗布?
實(shí)驗(yàn)步驟
一、稱(chēng)量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱(chēng)取牛肉膏,、蛋白胨,、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取,，放在小燒杯或表面皿中稱(chēng)量,，用熱水溶化后倒人燒杯。也可放在稱(chēng)量紙上,，稱(chēng)量后直接放人水中,，這時(shí)如稍微加熱，牛肉膏便會(huì)與稱(chēng)量紙分離,，然后立即取出紙片,。
蛋白胨很易吸濕，在稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要迅速,。另外,，稱(chēng)藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜，一把牛角匙用于一種藥品,，或稱(chēng)取一種藥品后,，洗凈，擦干,，再稱(chēng)取另一藥品,。瓶蓋也不要蓋錯(cuò)。
二,、溶化
在上述燒杯中先加人少于所需要的水量,，用玻棒攪勻，然后,，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解,，或在磁力攪拌器上加熱溶解（圖1）將藥品*溶解后，補(bǔ)充水到所需的總體積,，如果配制固體培養(yǎng)基時(shí)，將稱(chēng)好的瓊脂放人已溶的藥品中,，再加熱溶化,，zui后補(bǔ)足所損失的水分,，在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時(shí)，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中,，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中,，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進(jìn)行,，節(jié)省時(shí)間,。
在瓊脂溶化過(guò)程中，應(yīng)控制火力,，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器,。同時(shí)，需不斷攪拌,，以防瓊脂糊底燒焦,。配制培養(yǎng)基時(shí)，不可用銅或鐵鍋加熱溶化,，以免離子進(jìn)入培養(yǎng)基中,，影響細(xì)菌生長(zhǎng)。
三,、調(diào)pH
在未調(diào)pH前,，先用楂密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸,，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌,，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)7.6,。反之,，用lmol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。
對(duì)于有些要求pH較的微生物,，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計(jì)進(jìn)行（使用方法可參考有關(guān)說(shuō)明書(shū)）,。
pH不要調(diào)過(guò)頭，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度,。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時(shí),，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固,。因此,，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分來(lái)滅菌后再混合，或在中性pH條件下滅菌,，再調(diào)整pH,。
四、過(guò)濾
趁熱用濾紙或多層紗布過(guò)濾,，以利某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察,，一般無(wú)特殊要求的情況下,，這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)勿需過(guò)濾）。
五,、分裝
1. 按實(shí)驗(yàn)要求,，可將配制的培養(yǎng)基分裝人試管內(nèi)或三角燒瓶?jī)?nèi)。分裝裝置見(jiàn)圖2,。
培養(yǎng)基分裝裝置
A. 漏斗分裝裝置,；B. 自動(dòng)分裝器
1. 鐵架；2. 漏斗,；3. 乳膠管,；4. 彈簧夾；5. 玻管,；6. 流速調(diào)節(jié),；7. 裝量調(diào)節(jié)；8. 開(kāi)關(guān)
2. 液體分裝
分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜,。分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定,，一般以不超過(guò)三角瓶容積的一半為宜，如果是用于振蕩培養(yǎng)用,，則根據(jù)通氣量的要求酌情減少,；有的液體培養(yǎng)基在滅菌后，要補(bǔ)加一定量的其他無(wú)菌成分,，如抗生素等,，則裝量一定要準(zhǔn)確。
3. 固體分裝
分裝試管,，其裝量不超過(guò)管高的1/5,，滅菌后制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜,。
4. 半固體分裝
試管一般以試管髙度的1/3為宜,，滅菌后垂直待凝。
分裝過(guò)程中,，注意不要使培養(yǎng)甚沾在管（瓶）上,，以免沾污棉塞而引起污染。
六,、加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染,，并保證有良好的通氣性能,。
七、包扎
加塞后，將全部試管用麻繩捆好,，再在棉塞外包一層牛皮紙,，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞， 其外再用一道麻繩扎好,，用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱(chēng)、組別,、配制日期,。三角燒瓶加塞后，外包牛皮紙,，用麻繩以活結(jié)形式扎好,，使用時(shí)容易解開(kāi)，同樣用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱(chēng),、組別,、配制曰期（有條件的實(shí)驗(yàn)室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙,，省去用繩扎,，而且效果好。）
八,、滅菌
將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa,，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌,。
九,、擱置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,，擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半為宜（圖3）,。
十、無(wú)菌檢查
將滅菌培養(yǎng)基放人37 ℃的溫室中培養(yǎng)24-48 h,，以檢査滅菌是否*,。