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牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方
閱讀：2645 發(fā)布時(shí)間：2015-12-30實(shí)驗(yàn)方法原理
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用zui廣泛和zui普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，有時(shí)又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的zui基本的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，所以可供作微生物生長(zhǎng)繁殖之用?；A(chǔ)培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI,。其中牛肉膏為微生物提供碳源,、能源、 磷酸鹽和維生素,，蛋白胨主要提供氮源和維生素,，而NaCI提供無(wú)機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加人一定量瓊脂作凝固劑,，瓊脂在常用濃度下96℃時(shí)溶化,，實(shí)際應(yīng)用時(shí)，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網(wǎng)煮沸溶化,，以免瓊脂燒焦,。瓊脂在40℃時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用,。固體培養(yǎng)基中瓊脂的含量根據(jù)瓊脂的質(zhì)量和氣溫的不同而有所不同,。
由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細(xì)菌,，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細(xì)菌的生長(zhǎng)繁殖,。
牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是我司常見代理產(chǎn)品,，我司代理BD品牌培養(yǎng)基多年，一直以的質(zhì)量贏得客戶的信賴與支持,。本章上海恒遠(yuǎn)將為您具體解析牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方：
牛肉膏：3.0 g
蛋白胨：10.0 g
NaCI：5.0 g
水：1 000 ml
pH：7.4-7.6
試劑,、試劑盒
牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂氫氧化鈉鹽酸
儀器,、耗材
試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養(yǎng)基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記號(hào)筆麻繩紗布?
實(shí)驗(yàn)步驟
一,、稱量
按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨,、NaCl放人燒杯中,，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量,，用熱水溶化后倒人燒杯,。也可放在稱量紙上，稱量后直接放人水中,，這時(shí)如稍微加熱,，牛肉膏便會(huì)與稱量紙分離，然后立即取出紙片,。
蛋白胨很易吸濕,，在稱取時(shí)動(dòng)作要迅速。另外,，稱藥品時(shí)嚴(yán)防藥品混雜,，一把牛角匙用于一種藥品，或稱取一種藥品后,，洗凈,，擦干，再稱取另一藥品,。瓶蓋也不要蓋錯(cuò),。
二、溶化
在上述燒杯中先加人少于所需要的水量,，用玻棒攪勻,，然后，在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解,，或在磁力攪拌器上加熱溶解（圖1）將藥品*溶解后,，補(bǔ)充水到所需的總體積，如果配制固體培養(yǎng)基時(shí),，將稱好的瓊脂放人已溶的藥品中,，再加熱溶化,，zui后補(bǔ)足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養(yǎng)基時(shí),，一般也可先將一定量的液體培養(yǎng)基分裝于三角瓶中,，然后按1.5%-2.0%的量將瓊脂直接分別加人各三角瓶中，不必加熱溶化,，而是滅菌和加熱溶化同步進(jìn)行,，節(jié)省時(shí)間。
在瓊脂溶化過(guò)程中,，應(yīng)控制火力,，以免培養(yǎng)基因沸騰而溢出容器。同時(shí),，需不斷攪拌,，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養(yǎng)基時(shí),，不可用銅或鐵鍋加熱溶化,，以免離子進(jìn)入培養(yǎng)基中，影響細(xì)菌生長(zhǎng),。
三,、調(diào)pH
在未調(diào)pH前，先用楂密pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH,，如果偏酸,，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH,，直至pH達(dá)7.6,。反之，用lmol/L HCl進(jìn)行調(diào)節(jié),。
對(duì)于有些要求pH較的微生物,，其pH的調(diào)節(jié)可用酸度計(jì)進(jìn)行（使用方法可參考有關(guān)說(shuō)明書）。
pH不要調(diào)過(guò)頭,，以避免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度,。配制pH低的瓊脂培養(yǎng)基時(shí)，若預(yù)先調(diào)好pH并在高壓蒸氣下滅菌,，則瓊脂因水解不能凝固,。因此，應(yīng)將培養(yǎng)基的成分和瓊脂分來(lái)滅菌后再混合,，或在中性pH條件下滅菌,，再調(diào)整pH。
四,、過(guò)濾
趁熱用濾紙或多層紗布過(guò)濾,，以利某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察,，一般無(wú)特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)勿需過(guò)濾）,。
五,、分裝
1. 按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝人試管內(nèi)或三角燒瓶?jī)?nèi),。分裝裝置見圖2,。
培養(yǎng)基分裝裝置
A. 漏斗分裝裝置；B. 自動(dòng)分裝器
1. 鐵架,；2. 漏斗,；3. 乳膠管；4. 彈簧夾,；5. 玻管,；6. 流速調(diào)節(jié),；7. 裝量調(diào)節(jié),；8. 開關(guān)
2. 液體分裝
分裝高度以試管髙度的1/4左右為宜。分裝三角瓶的量則根據(jù)需要而定,，一般以不超過(guò)三角瓶容積的一半為宜,，如果是用于振蕩培養(yǎng)用，則根據(jù)通氣量的要求酌情減少,；有的液體培養(yǎng)基在滅菌后,，要補(bǔ)加一定量的其他無(wú)菌成分，如抗生素等,，則裝量一定要準(zhǔn)確,。
3. 固體分裝
分裝試管，其裝量不超過(guò)管高的1/5,，滅菌后制成斜面,。分裝三角燒瓶的量不超過(guò)三角燒瓶容積的一半為宜。
4. 半固體分裝
試管一般以試管髙度的1/3為宜,，滅菌后垂直待凝,。
分裝過(guò)程中，注意不要使培養(yǎng)甚沾在管（瓶）上,，以免沾污棉塞而引起污染,。
六、加塞
培養(yǎng)基分裝完畢后,，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等),，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能,。
七,、包扎
加塞后,，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙,，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞,， 其外再用一道麻繩扎好，用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱,、組別,、配制日期。三角燒瓶加塞后,，外包牛皮紙,，用麻繩以活結(jié)形式扎好，使用時(shí)容易解開,，同樣用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱,、組別、配制曰期（有條件的實(shí)驗(yàn)室,，可用市售的鋁箔代替牛皮紙,，省去用繩扎，而且效果好,。）
八,、滅菌
將上述培養(yǎng)基以0.103 MPa，121℃,，20 min高壓蒸氣滅菌,。
九、擱置斜面
將滅菌的試管培養(yǎng)基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多）,，將試管口端擱在玻棒或其他合適高度的器具上,，擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半為宜（圖3）。
十,、無(wú)菌檢查
將滅菌培養(yǎng)基放人37 ℃的溫室中培養(yǎng)24-48 h,，以檢査滅菌是否*。