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      如果說明書中有推薦的稀釋比例,，請按照該稀釋比例進行實驗,。但是由于標(biāo)本類型、實驗條件,、操作環(huán)境等各種因素的影響,，推薦濃度僅作為參考。實驗者需要在推薦濃度周圍進行多個濃度梯度的實驗,，從中發(fā)現(xiàn)zui合適的稀釋比例,。
　　如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Useatanassaydependentdilution",，就需要做大量的預(yù)實驗來摸索zui合適的比例了,。未純化的抗體一般在說明書中不會標(biāo)明抗體的濃度，因為大部分全抗血清,、培養(yǎng)上清或腹水形式的產(chǎn)品濃度都是沒有經(jīng)過測定的,。如果未純化抗體產(chǎn)品的說明書中沒有標(biāo)明其中特異性抗體的濃度，實驗者可以參考下表中“估計濃度"確定各種實驗稀釋比例,。
一般來說,，抗體說明書都會提供一個稀釋度范圍，但是,，有些公司生產(chǎn)的抗體,，其說明書上沒有提供抗體稀釋度。這是可以理解的,，因為如果說明書上標(biāo)明的抗體稀釋度如果高的話,，就說明這種抗體效價不高，質(zhì)量不好,。為此,，實驗者可以先在網(wǎng)上搜索一些相關(guān)的文獻，文獻的方法與材料中一般會把抗體來源以及稀釋度都詳細(xì)的標(biāo)出的,。但真正做實驗時，還是要根據(jù)自己實驗樣品的情況和檢測指標(biāo)表達(dá)的豐富程度等因素先摸索一下抗體的稀釋度的,。
       所以在做預(yù)實驗時,，就采用倍比稀釋法，先做一個梯度,，比如1：100,，1：200，1：400,，1：800,，1：1600. 看看在這幾個梯度范圍內(nèi),，樣品中的目的蛋白的表達(dá)情況，然后再從中確定你認(rèn)為的稀釋度進行正式實驗,，這樣做比較好一些,。由于標(biāo)本類型、實驗條件,、操作環(huán)境等各種因素的影響,，推薦濃度僅作為參考。
      一抗稀釋液一般為PBS/0.4% Triton X-100/1%BSA,。