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恒遠針對植物組織樣本的處理辦法解析

閱讀:1630          發(fā)布時間:2015-8-6

上海恒遠生物提醒收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,,儲存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月,。-70度可保存6個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶。以下恒遠針對植物組織樣本的處理辦法進行說明:歡迎參考應用,。

一,、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二,、組織勻漿的制備

1,、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,,準確稱重,,放入5ml的勻漿管中,。

2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊,。

3、勻漿的方式:手工勻漿,,機器勻漿,。

① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手將搗桿垂直插入套管中,,上下轉動研磨數(shù)十次(6~8分鐘),,充分研碎,制成20%的勻漿液,。

② 機器勻漿:用組織搗碎機10000~15000 轉/分 上下研磨制成20%組織勻漿,,也可用內(nèi)切式組織勻漿機制備(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,,連續(xù)3~5次,,在冰水中進行,可適當延長勻漿時間),

鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片,、染色均可以),,顯微鏡下觀察細胞是否破碎,若沒有則可延長勻漿時間,。

4,、將制備好的20%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機4000轉/分左右,離心10~15分鐘,取上清液進行測定.

三,、樣本保存:

        植物組織樣本暫時不測定,,可立即低溫凍存,溫度越低越好,,中間如*凍融,,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。

        制備好的勻漿液建議不要凍存,當天進行測定,如放置時間過長相關酶活會有所下降,部分指標4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測定可存5~7天等)

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