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技術(shù)文章

恒遠(yuǎn)針對(duì)植物組織樣本的處理辦法解析

閱讀:1749          發(fā)布時(shí)間:2015-8-6

上海恒遠(yuǎn)生物提醒收集標(biāo)本前必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定,。對(duì)收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本,,儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,,將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存,。避免反復(fù)凍融,。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí),-20℃可保存1個(gè)月,。-70度可保存6個(gè)月,。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。以下恒遠(yuǎn)針對(duì)植物組織樣本的處理辦法進(jìn)行說(shuō)明:歡迎參考應(yīng)用,。

一,、勻漿介質(zhì)

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據(jù)樣本及測(cè)定指標(biāo)的情況自行設(shè)定濃度,目的是保持樣本的等滲環(huán)境。

二,、組織勻漿的制備

1,、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,,準(zhǔn)確稱重,,放入5ml的勻漿管中。

2,、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質(zhì)于勻漿管中,,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

3,、勻漿的方式:手工勻漿,,機(jī)器勻漿。

① 手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中,,右手將搗桿垂直插入套管中,,上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次(6~8分鐘),充分研碎,制成20%的勻漿液,。

② 機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~15000 轉(zhuǎn)/分 上下研磨制成20%組織勻漿,,也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(勻漿時(shí)間10秒/次,間隙30秒,,連續(xù)3~5次,,在冰水中進(jìn)行,可適當(dāng)延長(zhǎng)勻漿時(shí)間),

鏡檢觀察:取少量組織勻漿作涂片(直接涂片,、染色均可以),,顯微鏡下觀察細(xì)胞是否破碎,若沒(méi)有則可延長(zhǎng)勻漿時(shí)間,。

4、將制備好的20%勻漿液用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)4000轉(zhuǎn)/分左右,離心10~15分鐘,,取上清液進(jìn)行測(cè)定.

三,、樣本保存:

        植物組織樣本暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,,溫度越低越好,,中間如*凍融,-20℃以下可保存三個(gè)月,-70℃以下可保存六個(gè)月,。

        制備好的勻漿液建議不要凍存,當(dāng)天進(jìn)行測(cè)定,如放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)相關(guān)酶活會(huì)有所下降,部分指標(biāo)4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測(cè)定可存5~7天等)

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