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羅丹明123染色步驟解析
閱讀：15097 發(fā)布時間：2015-7-21上海恒遠生物供應(yīng)的熒光染料羅丹明123（Rh123）是一種可對活細胞線粒體染色的細胞染色試劑,。Rh123可透過細胞膜且在活細胞的線粒體內(nèi)聚集,，并發(fā)出黃綠色熒光,。Rh123用于對許多種細胞進行染色,，包括植物細胞和細菌,。由于細胞內(nèi)ATP的量與Rh123的熒光強度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細胞內(nèi)的ATP,。Rh123還用于癌癥研究,。
Rhodamine 123 染色
中文名稱：羅丹明 123
目 的：測細胞內(nèi)線粒體的跨膜電位
EX/EM： 505/534
染液配制： 羅丹明123 粉劑用甲醇配制成1mg/ml的儲備液，100ul/支分裝,，-20℃保存,。染色時用Dulbecco’s PBS緩沖液將其稀釋為5ug/ml。
說明：激光染料,，生物染色。
別名：,；2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-
yl)benzoic acid methyl ester
外觀：紅色至棕色粉末溶解性：溶于水,。溶于乙醇，參考濃度1mg/ml,。
英文名：Rhodamine
是一種熒光染
說明：激光染料,，生物染色。
別名：,；2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-
yl)benzoic acid methyl ester
外觀：紅色至棕色粉末
溶解性：溶于水,。溶于乙醇，參考濃度1mg/ml,。
英文名：Rhodamine
是一種熒光染料,，鄰苯二酚類料，鄰苯二酚類
染色步驟：
培養(yǎng)細胞
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2～3次(緩沖液預(yù)熱至室溫或37℃)
Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小時
Dulbecco’s PBS緩沖液漂洗2～3次
加0.5ml Dulbecco’s PBS,，上機測量
Fluo-3-AM 染色 (測細胞內(nèi)游離鈣離子濃度)
原理：
AM酯的羧酸經(jīng)修改不帶電荷,，易浸入細胞。一旦進入細胞,，親脂性集團被非特異酯酶切斷,，使其帶電荷，從而溢出細胞大大減慢,。一般,，酯化集團水解對于結(jié)合靶離子是必須的。AM酯水解顯顏色或熒光的特點可用于檢查其自發(fā)水解,。
保存：
指示劑干燥避光4℃或-20℃可長期保存,。
AM酯易水解,，發(fā)貨瓶中至少可放六個月。
用時AM應(yīng)溶解于無水DMSO,，并盡快使用（一周內(nèi)）,，否則細胞運載能力下降。AM的DMSO儲備液應(yīng)避光,、冷凍,、干燥保存。鹽的儲備液應(yīng)用蒸餾水或緩沖液制備,，冷凍-20℃避光保存,，可放6個月。
應(yīng)用：
用細胞浸透AM酯運載技術(shù)：
1.在生理緩沖媒介中將DMSO稀釋至1-5μM,。不可用含胺的緩沖液如Tris,。
2.有機陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑苯甲酸（1－2.5mM）或sulfinpyrazone(0.1-0.25mM)可加入細胞外液以減少指示劑去酯后的滲漏。苯甲酸和sulfinpyrazone是很堿性的,，所以之后要重調(diào)pH值,。
3.AM酯孵育細胞一般在20－37℃，15－60分鐘,，準確的濃度,，時間和溫度靠經(jīng)驗摸索。AM酯運載技術(shù)有一個內(nèi)在問題即亞細胞隔閡,，降低孵育溫度可以減輕這一副作用,。
4.檢測熒光前，建議細胞在無指示劑媒介中（有陰離子轉(zhuǎn)運抑制劑）洗,，以去掉細胞表面的非特異吸附的染料,。而后再孵育30分鐘來進一步使細胞內(nèi)AM酯*脫掉。熒光素泄漏引起的背景高可以在實驗前在細胞外加入抗熒光素抗體來防止,。
目 的：測細胞內(nèi)游離鈣離子濃度
EX/EM：探針在細胞外液無熒光,，進入細胞后zui大激發(fā)波長和發(fā)射波長為464/526
方法一：
染液配制：Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM濃度 1mM)，15ul/支分裝,，-20℃保存,。染色時用15～50mM HEPES緩沖液將其稀釋為1～20uM(如1.5ml 為10uM)。
染色步驟：
培養(yǎng)細胞
緩沖液漂洗2～3次
Fluo-3-AM (1～20uM) 37℃或室溫孵育0.5～1小時
緩沖液漂洗2～3次
加0.5ml 緩沖液,，上機測量
上海恒遠供應(yīng)產(chǎn)品參數(shù)：羅丹明123 1 WinID:0UNV 中文名稱:羅丹明123 英文名稱:Rhodamine 123 別名名稱:2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester