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Elisa法中血清標(biāo)本的處理保存意見(jiàn)

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等,，具有快速,、靈敏、簡(jiǎn)便,、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn),。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)中血清的具體處理保存意見(jiàn)，請(qǐng)跟隨小編一起了解下：

?(1)要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血,。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因此,，在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。
(2)樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的生長(zhǎng)，其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
(3)血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作,，則建議冰凍保存,。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下,。
(4)冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果,。此外,，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意，不要進(jìn)行劇烈振蕩,，反復(fù)顛倒混勻即可,。
(5)標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè),。

Elisa技術(shù)可以充分利用單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn),，并能利用某些非免疫反應(yīng)試劑（如SPA、凝集素等）的作用,，發(fā)展成為許多新方法,。此外，發(fā)展Elisa技術(shù)還可以從酶及其底物兩方面著手,。這是因?yàn)椋?,，用于Elisa技術(shù)的酶其種類(lèi)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于可用作RIA檢測(cè)指示劑的放射性同位素。生物界的酶多種多樣,，有希望開(kāi)發(fā)很多類(lèi)型的酶用于Elisa,，并建立相應(yīng)的Elisa方法。相反,，自然界的化學(xué)元素是有限的,，放射性同位素的種類(lèi)更加有限。第二,，由于酶的多樣性,，酶作用底物也有多種多樣，與此相對(duì)應(yīng)的生色源或供氫體的種類(lèi)也有遠(yuǎn)大的開(kāi)發(fā)和發(fā)展?jié)摿Α?br>