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大鼠內(nèi)皮素1試劑盒說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍：                                                          

8μg/L -200μg/L

 

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中內(nèi)皮素1(ET-1)含量。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)水平,。用純化的大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)皮素1(ET-1),，再與HRP標記的內(nèi)皮素1(ET-1)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)皮素1(ET-1)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)濃度,。

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

200μg/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
100μg/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
50μg/L l	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
25μg/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
12.5μg/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

 

 

1. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。  
3. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
5. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。
6. 溫育：操作同3。
7. 洗滌：操作同5,。
8. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
9. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

1. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
2. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃。

2．有效期：6個月

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