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    上海恒遠生物友情提醒雜交瘤細胞的保存與復蘇問題解答,，歡迎參考內(nèi)容,，或者我司訂購試劑產(chǎn)品,。謝謝您的光臨.上海恒遠生物祝您購物愉快！

我們根據(jù)實驗分析雜交瘤的保存

    當獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細胞后,，必須將一部分雜交瘤細胞保存,，否則在連續(xù)傳代的過程中，可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性,。另外在長期的培養(yǎng)過程中,，難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分,。保存方法如下：

    1．材料

    (1) 細胞：取對數(shù)生長期的細胞。

    (2) 10％二甲基亞砜保護液（二甲基亞砜能損壞濾器,，而又被高壓所破壞,，所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是品,，無菌）：含10％二甲基亞砜,、20％滅活胎牛血清,，70％RPMI—1640液。

    (3) 20％FCS—1640培養(yǎng)液：含青霉素100U/ml,，鏈霉素100μg/ml,。

    (4) 滅菌的2ml安瓶等

    2．操作方法

    (1) 去掉細胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液,，使細胞懸浮,。

    (2) 1 000r/min離心10min，去上清,。細胞沉淀用10％二甲基亞砜保護液制成懸液,，使成1.0×107細胞／ml。

    (3) 取樣,，臺盼蘭染色,，計數(shù)活細胞，應在95％以上,。

    (4) 用注射器將細胞分裝安瓶,，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶,。

    (5) 放4℃ 2h,。

    (6) 放液氮罐氣態(tài)部分（-70℃）15h。

    (7) 轉入液氮部分,。

    （二）復蘇

    1．從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶,。

    2．無菌操作打開安瓶，取出細胞懸液,，轉入組織培養(yǎng)瓶,。

    3．逐滴緩慢加入20％FCS－1640培養(yǎng)液3.5ml，這個過程延續(xù)3min,。

    4．5％CO2飽和濕度,，37℃培養(yǎng)。

    5．4h后棄去培養(yǎng)液上清,，加入新鮮的20％FCS－1640培養(yǎng)液,。

    6．繼續(xù)培養(yǎng)，換液,，以至形成單層,。

看完以上建議，您應該對雜交瘤有所了解了吧,，我司從事試劑盒,，試劑研究多年，有著豐富的科研經(jīng)驗,，為您在生物領域開辟新的實驗成功,。上海恒遠生物,，您身邊的科研專家！