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恒遠(yuǎn)詳解雜交瘤的具體保存及復(fù)蘇
閱讀:1368 發(fā)布時(shí)間:2014-5-20上海恒遠(yuǎn)生物友情提醒雜交瘤細(xì)胞的保存與復(fù)蘇問題解答,,歡迎參考內(nèi)容,,或者我司訂購試劑產(chǎn)品,。謝謝您的光臨.上海恒遠(yuǎn)生物祝您購物愉快!
我們根據(jù)實(shí)驗(yàn)分析雜交瘤的保存
當(dāng)獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后,,必須將一部分雜交瘤細(xì)胞保存,,否則在連續(xù)傳代的過程中,可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性,。另外在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過程中,,難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分,。保存方法如下:
1.材料
(1) 細(xì)胞:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,。
(2) 10%二甲基亞砜保護(hù)液(二甲基亞砜能損壞濾器,而又被高壓所破壞,,所以不能過濾或高壓消毒,。其本身就是品,無菌):含10%二甲基亞砜,、20%滅活胎牛血清,,70%RPMI—1640液。
(3) 20%FCS—1640培養(yǎng)液:含青霉素100U/ml,,鏈霉素100μg/ml,。
(4) 滅菌的2ml安瓶等
2.操作方法
(1) 去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液,加入10%FCS—1640液,,使細(xì)胞懸浮,。
(2) 1 000r/min離心10min,去上清,。細(xì)胞沉淀用10%二甲基亞砜保護(hù)液制成懸液,,使成1.0×107細(xì)胞/ml。
(3) 取樣,,臺(tái)盼蘭染色,,計(jì)數(shù)活細(xì)胞,應(yīng)在95%以上,。
(4) 用注射器將細(xì)胞分裝安瓶,,每瓶0.5ml~1.0ml,熔封安瓶,。
(5) 放4℃ 2h,。
(6) 放液氮罐氣態(tài)部分(-70℃)15h。
(7) 轉(zhuǎn)入液氮部分,。
(二)復(fù)蘇
1.從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶,。
2.無菌操作打開安瓶,取出細(xì)胞懸液,,轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶,。
3.逐滴緩慢加入20%FCS-1640培養(yǎng)液3.5ml,,這個(gè)過程延續(xù)3min。
4.5%CO2飽和濕度,,37℃培養(yǎng),。
5.4h后棄去培養(yǎng)液上清,加入新鮮的20%FCS-1640培養(yǎng)液,。
6.繼續(xù)培養(yǎng),,換液,以至形成單層,。
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