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ATCC細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作方法
基本原理 
通過在支持物（如蓋玻片）上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞,，可以應(yīng)用抗體檢測細(xì)胞表面抗原的表達(dá)或進(jìn)行酶細(xì)胞化學(xué)以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測,。該方法的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞貼壁牢固,，能夠維持細(xì)胞生長時的狀態(tài),。
試劑和設(shè)備
細(xì)胞懸浮液,；
6孔平底組織培養(yǎng)板,，或φ60 mm培養(yǎng)皿；
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片,；
含血清培養(yǎng)基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清,，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素）,；
超凈工作臺,； CO2孵箱；
蓋片鑷,；
操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布,；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）,；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,，將培養(yǎng)板取出,，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗要點(diǎn)及說明
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃,，并經(jīng)過鉻酸洗液處理,；
3．蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大,，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。