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除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒的合成方法
閱讀:1137 發(fā)布時(shí)間:2014-2-26除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒由美國(guó)abraxis合成,,這一項(xiàng)試劑的研究為生物領(lǐng)域帶來(lái)了另一類(lèi)新篇章 。以下是除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒的原理,,操作步驟,,及其注意事項(xiàng),讓我們來(lái)看看除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒是怎么合成的吧,。
適用
Abraxis合成除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒適用于定量檢測(cè)水樣中(底下水,,表面水,井水)芐氯菊脂和相關(guān)的合成除蟲(chóng)菊酯(見(jiàn)后面的交叉反應(yīng)表),。水樣的前處理步驟請(qǐng)看說(shuō)明書(shū),。如果要檢測(cè)土壤,作物,,和食品樣品的話(huà)請(qǐng)本公司索取相關(guān)資料,。
原理
Abraxis合成除蟲(chóng)菊酯檢測(cè)試劑盒應(yīng)用了酶聯(lián)免疫檢測(cè)原理測(cè)定芐氯菊脂和相關(guān)的合成除蟲(chóng)菊酯,。測(cè)試樣品和包被有合成除蟲(chóng)菊酯特異性抗體的磁性顆粒一起加入到一次性測(cè)試管中孵育20分鐘。然后添加合成除蟲(chóng)菊酯酶結(jié)合物,。樣品中的合成除蟲(chóng)菊酯和合成除蟲(chóng)菊酯酶結(jié)合物相互競(jìng)爭(zhēng)于磁性顆粒上的抗體結(jié)合位點(diǎn),。孵育30分鐘,在反應(yīng)中磁場(chǎng)應(yīng)用于固定測(cè)試管中的順磁顆粒(指結(jié)合合成除蟲(chóng)菊酯和酶標(biāo)芐氯菊脂復(fù)合物的磁性顆粒,,和它們的初始濃度成正比),,同時(shí)允許把沒(méi)有結(jié)合的試劑處理掉。在倒掉沒(méi)有發(fā)生反應(yīng)的試劑后用洗液清洗這些顆粒,。通過(guò)添加酶底物(過(guò)氧化氫)和顯色劑(TMB)可以檢測(cè)到合成除蟲(chóng)菊酯,。結(jié)合到合成除蟲(chóng)菊酯抗體上的芐氯菊脂酶標(biāo)物催化底物/顯色液混合物產(chǎn)了有色物質(zhì)。經(jīng)過(guò)30分鐘的孵育,,加入酸溶液終止穩(wěn)定反應(yīng),。因?yàn)槊笜?biāo)芐氯菊脂(結(jié)合物)和沒(méi)有標(biāo)記的合成除蟲(chóng)菊酯(樣品)在反應(yīng)中競(jìng)爭(zhēng)于抗體位點(diǎn)結(jié)合,所以顯色的深淺和樣品中合成除蟲(chóng)菊酯的濃度成反比,。
試劑盒組成
1,、包被有合成除蟲(chóng)菊酯抗體的磁性顆粒。
合成除蟲(chóng)菊酯抗體(抗芐氯菊脂單克隆抗體)被包被于磁性顆粒上,,這些顆粒懸浮于包含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的鹽性緩沖液中,。100測(cè)試,1瓶60mL,。
2,、合成除蟲(chóng)菊酯酶結(jié)合物。
HRP標(biāo)記的芐氯菊脂類(lèi)似物被稀釋在包含有保存劑和穩(wěn)定劑的鹽性緩沖液中,。100測(cè)試,,1瓶30mL。
3,、芐氯菊脂標(biāo)準(zhǔn)品
5瓶芐氯菊脂標(biāo)準(zhǔn)品(0.75,、2.5、5.0,、15.0 ppb),,每瓶2.0 mL,保存于含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液中,。
4,、對(duì)照 1瓶2ml
濃度為3.0 ppb 的芐氯菊脂,保存于含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液中,。
5,、稀釋劑/零標(biāo)準(zhǔn)
含有保護(hù)劑和穩(wěn)定劑的甲醇溶液,不含有任何可以檢測(cè)到的芐氯菊脂,。100檢測(cè),,1瓶35mL,。
6、顯色溶液
含有過(guò)氧化氫和TMB的有機(jī)堿溶液,。100檢測(cè),,1瓶65mL。
7,、終止液
0.5%的稀硫酸溶液,,100檢測(cè),1瓶60 mL,。
8,、洗液
加防腐劑的無(wú)離子水,100檢測(cè),,1瓶250 mL
9,、測(cè)試管
測(cè)試管,每包36支,,100檢測(cè),,共3包。
測(cè)試步驟
在操作之前一定要仔細(xì)閱讀以上內(nèi)容,。
1,、對(duì)于水樣可以直接按此說(shuō)明書(shū)處理,如果是其它樣品顆粒請(qǐng)我公司索取特定的樣品處理方法,。
2,、標(biāo)記測(cè)試管,,使標(biāo)準(zhǔn),、樣品和對(duì)照區(qū)分開(kāi)。
管號(hào) 1,、2 3,4 5,6 7,8 9,10 11 12 13 14
測(cè)試管內(nèi)容物 Diluent/Zero Standard,
0 ppb Standard1
0.75 ppb Standard2
2.5 ppb Standard3
5.0 ppb Standard4
15.0 ppb Control Sample1 Sample2 Sampe3
3,、在對(duì)應(yīng)的測(cè)試管中加入250 uL標(biāo)準(zhǔn),對(duì)照或樣品,。
4,、混勻包被有合成除蟲(chóng)菊酯抗體的磁性顆粒溶液,然后每個(gè)測(cè)試管加入500 uL,。
5,、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要產(chǎn)生氣泡,。
6,、在室溫下孵育20分。
7,、在每個(gè)測(cè)試管加入250 uL合成除蟲(chóng)菊酯酶結(jié)合物,。
8,、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要產(chǎn)生氣泡,。
9,、在室溫下孵育30分。
10,、在磁性分離架分離2分鐘,。
11、用同樣的操作手法輕輕倒出所有測(cè)試管中的液體,,并輕輕地把剩余液體吸取干凈,。
12、每個(gè)測(cè)試管中加入1 mL洗液,,渦旋震蕩1到2秒,,再在磁性分離器上分離2分鐘。
13,、從分離器上拿起支架,,慢慢翻轉(zhuǎn)來(lái)傾倒測(cè)試管中的液體,動(dòng)作一定要平緩保證液體是沿著試管的一邊持續(xù)的流出,。一直到支架反了過(guò)來(lái)的時(shí)候放在吸水墊上面使試管壁上的水被吸出,。提起來(lái)支架然后再放到吸水墊上面,反復(fù)操作幾次確保試管壁上的液體全部被移除,。
14,、重復(fù)步驟12,13 一次,。
15,、從分離器上拿下支架,然后每個(gè)測(cè)試管中加入500 uL的顯色液,。
16,、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要產(chǎn)生氣泡,。
17,、在室溫下孵育30分。
18,、在每個(gè)測(cè)試管中加入500 uL的終止液,。
19、在一個(gè)干凈的測(cè)試管中加入1 mL洗液,,作為步驟20中的空白,。
20、在加入終止液15分鐘后,在450nm的分光光度計(jì)測(cè)定,。
結(jié)果
手工計(jì)算
1,、 計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值。
2,、 計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/Bo(每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值除以 稀釋劑/零標(biāo)準(zhǔn) 的吸光度值),。
3、 以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/Bo值的Log 為Y軸,,合成除蟲(chóng)菊酯濃度的Ln為X軸作圖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。
4、 把樣品或?qū)φ盏?B/Bo插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)就可以計(jì)算出結(jié)果,。