日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

實(shí)驗(yàn)中磷酸化蛋白有哪些經(jīng)驗(yàn)之談,，以下為小編總結(jié)

1.  一定要在lysis buffer中加入蛋白酶抑制劑,，還要加入一定量的磷酸酶抑制劑，否則即使band壓出來(lái)也會(huì)很淺,，結(jié)果也不可信,。

2.  加一抗后4℃過(guò)一夜，保證抗體有充分的結(jié)合時(shí)間,。因?yàn)榱姿峄牡鞍字徽伎偟牡鞍琢康臉O少部分,。4℃也可使一抗重復(fù)使用多次。畢竟磷酸化的抗體都挺貴的,。二抗則室溫1小時(shí)即可,。

3.  磷酸化抗體的好壞是一個(gè)關(guān)鍵因素，所以要選擇好的廠商,。

4.  根據(jù)廠商的protocol來(lái)操作實(shí)驗(yàn),，這是實(shí)驗(yàn)成功的保證。

5.  抗體的稀釋倍數(shù)也要適當(dāng),，不同廠商也會(huì)有不同要求,。

6.  研究完某一蛋白的磷酸化情況后也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量。如壓完phospho-p38抗體后,，把相同的membrane做strip后再壓p38,，然后再strip一次，再壓內(nèi)標(biāo)actin,。

7.  做磷酸化蛋白WB時(shí),，除了目標(biāo)蛋白的band以外，往往會(huì)出現(xiàn)非特異性的band,。磷酸化抗體不好的話,，甚至?xí)撼龇翘禺愋缘腷and，而沒(méi)有你想要的band,，所以壓片以后,，你一定要根據(jù)markers比對(duì)一下，你壓出的band分子量是否正確,。

8.  磷酸化蛋白WB時(shí)backgroud也往往較深,，所以壓片時(shí)間要適當(dāng)，不能太長(zhǎng)或過(guò)短,，太長(zhǎng)則backgroud太深蓋住想要的那條band,，時(shí)間過(guò)短則可能沒(méi)有band或者band太淺,。

9.  磷酸化蛋白WB時(shí),，用TBST洗時(shí)也要注意一下,，搖床的轉(zhuǎn)速不要太快，洗的時(shí)間不要太長(zhǎng),，孵育一抗和二抗之后分別洗5 min 3次即可,，寧愿background深一些，總比做不出來(lái)強(qiáng)得多,。另外,，洗的時(shí)候，不要把幾張membrane疊在一起洗,。

10.  研究完某一蛋白的磷酸化情況后也要研究一下該蛋白總的表達(dá)量,。這有兩種方法，一是：相同的sample在不同的well中上樣兩次（可在相同的 gel上,，也可在不同的gel）,，其一壓磷酸化蛋白，另一壓該蛋白總的表達(dá)量（包括磷酸化和未磷酸化的該蛋白）,，甚至還可跑另一個(gè)gel,，壓內(nèi)標(biāo)。但是不 建議如此做,，因?yàn)檫@樣比較時(shí)誤差還是較大的,。

11.  Strip時(shí)一定要注意：membrane一定要*泡在strip solution中（可用較硬的塑料膜封好），然后要*浸入水中,，使受熱均勻,。這一點(diǎn)很重要，要不然,，隨后壓出來(lái)的總蛋白也好,，內(nèi)標(biāo)也好就會(huì)不均一，無(wú)法進(jìn)行比較,。

中國(guó)化工儀器網(wǎng)為您提供磷酸化蛋白檢測(cè)的詳細(xì)介紹和價(jià)格,如有意向請(qǐng)上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司,。我司供應(yīng)相關(guān)產(chǎn)品“

小鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)Elisa試劑盒
大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA 試劑盒
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體
磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗原
人磷酸化AKT蛋白(human AKT) ELISA試劑盒