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細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法
閱讀:1306 發(fā)布時(shí)間:2013-7-12細(xì)胞凋亡也就是實(shí)驗(yàn)中常說(shuō)的程序性細(xì)胞死亡,它是一種不同于壞死的由基因調(diào)控的細(xì)胞主動(dòng)性死亡過(guò)程,,是細(xì)胞在一定的生理或病理狀態(tài)下,,遵循自身的程序,自己結(jié)束自己生命的過(guò)程,,zui后細(xì)胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體,,而被其他細(xì)胞吞噬。
檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法:
光學(xué)顯微鏡檢查:
細(xì)胞涂片或組織切片在PAS或HE染色后,,即可在油鏡下觀察,,若同時(shí)進(jìn)行細(xì)胞免疫組化研究,則可判別AP細(xì)胞種類,。
判斷標(biāo)準(zhǔn):
①散在單個(gè)細(xì)胞,。
②細(xì)胞體積縮小,。
③輪廓清楚,,常有一環(huán)形的空白區(qū),胞漿嗜酸性,。
④核濃縮,,邊聚碎裂呈分散的嗜堿性塊。
⑤胞內(nèi)凋亡小體,。
⑥無(wú)炎癥反應(yīng),。
電子顯微鏡檢查
電鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法。細(xì)胞核和細(xì)胞器亞微結(jié)構(gòu)清晰易辨,,尤其是電子顯微鏡與數(shù)字圖形處理系統(tǒng)結(jié)合可觀察到超微結(jié)構(gòu)更細(xì)微的變化,。雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見(jiàn)胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時(shí)期的變化,。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡zui經(jīng)典、zui可靠的方法,,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn),。Ap過(guò)程的重要變化是細(xì)胞染色體的碎片狀分解,細(xì)胞器變化和生物膜呈空泡狀,。電鏡標(biāo)本的制備同常規(guī)處理,,電鏡下可見(jiàn)Ap細(xì)胞體積縮小,小體積細(xì)胞比例增高,。細(xì)胞表面纖毛喪失,,細(xì)胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開(kāi)始固縮,電子密度升高,。在初期細(xì)胞器仍保持完整,。掃描電鏡下Ab小體的表面生物膜形成大量氣泡和空泡,呈沸騰狀和凹陷狀變化,;透射電鏡下則呈圓形結(jié)構(gòu),,內(nèi)含多個(gè)或整個(gè)細(xì)胞器,也可含一部分細(xì)胞核,。