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技術(shù)文章

細(xì)胞凋亡的檢測方法

閱讀:1490          發(fā)布時間:2013-7-12

 細(xì)胞凋亡也就是實(shí)驗(yàn)中常說的程序性細(xì)胞死亡,它是一種不同于壞死的由基因調(diào)控的細(xì)胞主動性死亡過程,,是細(xì)胞在一定的生理或病理狀態(tài)下,,遵循自身的程序,自己結(jié)束自己生命的過程,,zui后細(xì)胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體,,而被其他細(xì)胞吞噬。

檢測細(xì)胞凋亡的方法:

 

光學(xué)顯微鏡檢查:

細(xì)胞涂片或組織切片在PAS或HE染色后,,即可在油鏡下觀察,,若同時進(jìn)行細(xì)胞免疫組化研究,則可判別AP細(xì)胞種類,。

判斷標(biāo)準(zhǔn):

①散在單個細(xì)胞,。

②細(xì)胞體積縮小。

③輪廓清楚,,常有一環(huán)形的空白區(qū),,胞漿嗜酸性。

④核濃縮,,邊聚碎裂呈分散的嗜堿性塊,。

⑤胞內(nèi)凋亡小體。

⑥無炎癥反應(yīng),。

電子顯微鏡檢查 

電鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法,。細(xì)胞核和細(xì)胞器亞微結(jié)構(gòu)清晰易辨,尤其是電子顯微鏡與數(shù)字圖形處理系統(tǒng)結(jié)合可觀察到超微結(jié)構(gòu)更細(xì)微的變化,。雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體,,但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu),因此用光鏡觀察難以令人滿意,,而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化,。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡zui經(jīng)典,、zui可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn),。Ap過程的重要變化是細(xì)胞染色體的碎片狀分解,,細(xì)胞器變化和生物膜呈空泡狀。電鏡標(biāo)本的制備同常規(guī)處理,,電鏡下可見Ap細(xì)胞體積縮小,,小體積細(xì)胞比例增高。細(xì)胞表面纖毛喪失,,細(xì)胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開始固縮,,電子密度升高。在初期細(xì)胞器仍保持完整,。掃描電鏡下Ab小體的表面生物膜形成大量氣泡和空泡,呈沸騰狀和凹陷狀變化,;透射電鏡下則呈圓形結(jié)構(gòu),,內(nèi)含多個或整個細(xì)胞器,也可含一部分細(xì)胞核,。

 

 

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