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磷酸鹽緩沖液的配制方法
閱讀:1129 發(fā)布時(shí)間:2013-6-14磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline,,簡(jiǎn)稱PBS)的是常用于生物學(xué)研究的一個(gè)緩沖溶液。PBS可以為三種溶液的英文縮寫,,分別是磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution),、磷酸鹽緩沖鹽水(phosphate buffered saline)及 磷酸鹽緩沖鈉(phosphate buffered sodium),其配制方法不同,,pH值不同,,發(fā)揮的生物學(xué)作用亦不*相同。
磷酸鹽緩沖液(PBS)配制方法:
稱取8g NaCl,、0.2g KCl,、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸餾水中,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,,zui后加蒸餾水定容至1L即可,。在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌(至少20分鐘),保存存于室溫或4℃冰箱中,。需要注意的是,,通常所說的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根濃度,而非Na 離子或K 離子的濃度,,Na 離子和K 離子只是用來調(diào)節(jié)滲透壓的,。如果是用于免疫組化的話,則需要在配置的時(shí)候分別加入100 u/ml青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH,、定容,、滅菌消毒。
PH 7.6 7.4 7.2 7.0
H2O 1000 1000 1000 1000
NaCl 8.5 8.5 8.5 8.5
Na2HPO4 2.2 2.2 2.2 2.2
NaH2PO4 0.1 0.2 0.3 0.4
根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來看,,新鮮配置的PBS攪勻后其PH值約在7.2-7.4之間,可是在溫度的影響下,,尤其在夏天,,其電離常數(shù)發(fā)生了改變,在經(jīng)過晝夜的時(shí)間后,,PH值會(huì)明顯改變(我親自測(cè)過偏酸),。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了,PH值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,,甚至可能導(dǎo)致陰性,。所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣,要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問題,。每次使用前用試紙測(cè)一下過夜了的PBS,,如果發(fā)生偏酸或偏堿,注意重新?lián)Q新液,。