日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

 

 細(xì)胞凋亡檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

 

細(xì)胞凋亡檢測(cè)可以：

（1）用于腫瘤細(xì)胞和組織在內(nèi)的不同種類病理標(biāo)本研究,；

（2）應(yīng)用于臨床診療，新藥研制,、生物制品開(kāi)發(fā),、腫瘤放化療,、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療,；

（3）對(duì)相關(guān)疾病的早期發(fā)現(xiàn)、放化療的療效評(píng)價(jià)具有舉足輕重的地位,。

實(shí)驗(yàn)方法原理

本實(shí)驗(yàn)用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞發(fā)生凋亡,，同時(shí)也有少數(shù)細(xì)胞發(fā)生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide,，PI）對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙重染色,，可以區(qū)別凋亡、壞死及正常細(xì)胞,。

 

三尖杉酯堿（HT）是我國(guó)自行研制的一種對(duì)急性粒細(xì)胞白血病,，急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內(nèi)作用2小時(shí),，即可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡,，并表現(xiàn)出典型的凋亡特征。

細(xì)胞膜是一選擇性的生物膜,，一般的生物染料如PI等不能穿過(guò)質(zhì)膜,。當(dāng)細(xì)胞壞死時(shí)，質(zhì)膜不完整,，PI就進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部,，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細(xì)胞著色,，凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞不著色,。而一些活細(xì)胞染料由于為親脂性物質(zhì)，可跨膜進(jìn)入活細(xì)胞,，因而可進(jìn)行活細(xì)胞染色,。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物,。與DNA特異結(jié)合（主要結(jié)合于A-T）堿基區(qū)）,，顯示凋亡細(xì)胞和活細(xì)胞,。凡是看到有凋亡小體的細(xì)胞都是凋亡細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)步驟

一,、試劑準(zhǔn)備

 

1.  三尖杉酯堿（HT）：300μg/ml,；

 

2.  Tris-HCl（pH7.5）：100mmol/L；

 

3.  EDTA緩沖液：5mol/L,；

 

4.   堿性裂解液：0.2mol/L NaOH,；

 

5.        醋酸鈉：3mol/L KAc（pH4.8）；

注意事項(xiàng)

1.  誘導(dǎo)培養(yǎng)HL-60細(xì)胞時(shí)間要準(zhǔn)確,；

 

2.  熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí),，由于熒光易碎滅，觀察時(shí)要盡量快,。