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技術(shù)文章

人胰島素試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

閱讀:2280          發(fā)布時(shí)間:2012-12-19

人胰島素試劑盒操作步驟:  
1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗(yàn)所需板條,未用的板條和干燥劑請(qǐng)放回鋁箔袋內(nèi)壓 實(shí)自封條,,密封口袋,,放回4℃。  
2.空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液,,其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品(100ul/孔),,用封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育90分鐘,?! ?br />3.提前20分鐘準(zhǔn)備生物素化抗體工作液?! ?br />4.洗板5次,。  
5.空白孔加生物素化抗體稀釋液,,其余孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔),。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,36℃孵箱孵育60分鐘,?! ?br />6.提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置,?! ?br />7.洗板5次?! ?br />8.空白孔加酶結(jié)合物稀釋液,,其余孔加入酶結(jié)合物工作液(100ul/孔)。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔,,36℃孵箱,,避光孵育30分鐘?! ?br />9.打開酶標(biāo)儀電源,,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序,?! ?br />10.洗板5次?! ?br />11.加入顯色底物(TMB)100ul/孔,,避光36℃孵箱,避光孵育15分鐘,?! ?br />12.加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測(cè)量OD450值(3分鐘內(nèi))。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果,?! ?br />13.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束,。  建議保存酶標(biāo)板框,,以備下次或者今后試驗(yàn)使用,。 
人胰島素試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:  
1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,,以平衡至室溫,。  
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:20),。未用完的放回4℃,。  
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本稀釋液0.5ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,,靜置15分鐘,,待其充分溶解后,輕輕混勻(濃度為1000 pg/ml),。然后根據(jù)需要進(jìn)行稀釋,。(建議標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度: 1000,、500,、250、125,、62.5,、31.25、15.6,、0 pg/ml),。復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品原液(1000 pg/ml)若未用完請(qǐng)分裝后放入-20℃以下電冰箱內(nèi)保存,保存兩個(gè)月,。已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品請(qǐng)廢棄,。  
4. 生物素化抗體工作液:按當(dāng)次試驗(yàn)所需要得用量,,使用前20分鐘,,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:30)成工作濃度。當(dāng)日使用,。若實(shí)驗(yàn)次數(shù)過多導(dǎo)致生物素化 抗體量不足,,可向我們公司單獨(dú)購買生物素化抗體。(須提供抗體批號(hào))  
5. 酶結(jié)合物工作液:按當(dāng)次試驗(yàn)所需要得用量,,使用前20分鐘,,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃 縮酶結(jié)合物(1:30) 成工作濃度。當(dāng)日使用,。若實(shí)驗(yàn)次數(shù)過多導(dǎo)致濃縮酶結(jié)合物量不足,, 可向我們公司單獨(dú)購買濃縮酶結(jié)合物。(須提供酶結(jié)合物批號(hào))  
洗滌方法:  
1. 自動(dòng)洗板機(jī):要求注入的洗滌液為350ul,注入與吸出間隔15-30秒,。洗板5次,。  
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350ul,靜置30秒后甩盡液體,,在厚迭吸水紙上拍干,。洗板5次?!?/p>

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