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人胰島素試劑盒實驗原理
閱讀:1893 發(fā)布時間:2012-12-19人胰島素試劑盒操作步驟:
1.從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條,,未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實自封條,,密封口袋,,放回4℃,?! ?br />2.空白孔加標準品和標本稀釋液,其余相應孔中加標本或不同濃度標準品(100ul/孔),,用封板膠紙封住反應孔,,36℃孵箱孵育90分鐘?! ?br />3.提前20分鐘準備生物素化抗體工作液,。
4.洗板5次,?! ?br />5.空白孔加生物素化抗體稀釋液,其余孔加入生物素化抗體工作液(100ul/孔),。用新封板膠紙封住反應孔,,36℃孵箱孵育60分鐘?! ?br />6.提前20分鐘準備酶結合物工作液,。避光室溫(22-25 ) ℃ 放置?! ?br />7.洗板5次,。
8.空白孔加酶結合物稀釋液,,其余孔加入酶結合物工作液(100ul/孔),。用新封板膠紙封住反應孔,36℃孵箱,,避光孵育30分鐘,。
9.打開酶標儀電源,,預熱儀器,,設置好檢測程序?! ?br />10.洗板5次,。
11.加入顯色底物(TMB)100ul/孔,,避光36℃孵箱,,避光孵育15分鐘?! ?br />12.加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值(3分鐘內(nèi)),。在儀器保存讀數(shù)結果并打印一份紙質(zhì)結果,。
13.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結束,?! 〗ㄗh保存酶標板框,以備下次或者今后試驗使用,?!?br />人胰島素試劑盒檢測前準備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,以平衡至室溫,?! ?br />2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:20)。未用完的放回4℃,?! ?br />3. 標準品: 加入標準品/標本稀釋液0.5ml至凍干標準品中,靜置15分鐘,,待其充分溶解后,,輕輕混勻(濃度為1000 pg/ml)。然后根據(jù)需要進行稀釋,。(建議標準曲線使用以下濃度: 1000,、500、250,、125,、62.5、31.25,、15.6,、0 pg/ml)。復溶標準品原液(1000 pg/ml)若未用完請分裝后放入-20℃以下電冰箱內(nèi)保存,,保存兩個月,。已稀釋的標準品請廢棄?! ?br />4. 生物素化抗體工作液:按當次試驗所需要得用量,,使用前20分鐘,,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:30)成工作濃度,。當日使用。若實驗次數(shù)過多導致生物素化 抗體量不足,,可向我們公司單獨購買生物素化抗體,。(須提供抗體批號)
5. 酶結合物工作液:按當次試驗所需要得用量,使用前20分鐘,,以酶結合物稀釋液稀釋濃 縮酶結合物(1:30) 成工作濃度,。當日使用,。若實驗次數(shù)過多導致濃縮酶結合物量不足, 可向我們公司單獨購買濃縮酶結合物,。(須提供酶結合物批號)
洗滌方法:
1. 自動洗板機:要求注入的洗滌液為350ul,,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次,?! ?br />2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,,每孔加洗滌液350ul,,靜置30秒后甩盡液體,在厚迭吸水紙上拍干,。洗板5次,。