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大鼠幽門螺旋菌（IgG）ELISA試劑盒使用操作原理
閱讀：1313 發(fā)布時間：2012-12-10大鼠幽門螺旋菌IgG試劑盒檢測原理：
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠幽門螺旋菌IgG（Hp-IgG）單克隆抗體透明酶標包被板中,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分，再加入酶標工作液,，溫育足夠時間后,，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A,、B,，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色,，顏色的深淺與樣品中大鼠幽門螺旋菌IgG（Hp-IgG）濃度呈正相關,，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標準品和樣品的OD值,，計算樣本中大鼠幽門螺旋菌IgG（Hp-IgG）含量,。
大鼠幽門螺旋菌（IgG）ELISA試劑盒產(chǎn)品樣品采集：
收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當天進行檢測的標本,，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本?
將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融,。標本2-8℃可保存48小時,，-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月,。部分激素類標本需添加抑肽酶,。
血漿：
應根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，加入 10 ％（ v/v ）抗凝劑 （ 0.1M 檸檬酸鈉或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2） 混合
10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）。仔細收集上清,。如有沉淀形 成,，應再次離心。
血清：
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。收集上清。如有沉淀形成,，應再次離心,。
組織標本：
切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ,，緩沖液中可加入 1 μ g/L 蛋白酶抑制劑或 50U/ml 的 Aprotinin （ 抑肽酶）,。用手工或勻漿器將標本勻
漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分）,。仔細收集上清置于 -20 度或 - 70 度保存,，如有必要，可以將樣品濃縮干燥,。
大鼠幽門螺旋菌（IgG）ELISA試劑盒注意事項：
1,、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,。
2,、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存,。
3、建議所有的標準品,、樣本和空白對照都做雙份檢測,，取平均值，以減小實驗誤差,。
4,、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍，計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度,。
5,、本試劑盒定量范圍為6.25-200ng/L，超過此范圍,，為標準曲線延伸計算所得,，不做為準確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果（6.25-200ng/L范圍內(nèi),，乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度,。
6、若顯色過淺,，可適當延長底物溫育時間,。
7、為避免交叉污染,，標準品,、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液,、樣本稀釋液和底物等公共組分,，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜,。
8,、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用,。
9,、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。
大鼠幽門螺旋菌（IgG）ELISA試劑盒操作步驟：
1,、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘,。
2,、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3,、加標準品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標包被板,，固定于框架上，分別設置標準品孔,、待測樣本孔和空白對照孔,，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL,；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加,。
4,、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL,，空白對照孔不加,。
7、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min,。
8,、洗板：棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）,。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL,，再加入顯色劑B液 50μL,，平板混勻器混勻30s（或用手輕輕震蕩混勻30s），37℃避光顯色15min,。
10,、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL,，終止反應（顏色由藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11、測定：以空白孔調(diào)零,，在終止后15分鐘內(nèi),，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
12,、計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣本的OD值,，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算,。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù),。