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ELISA實驗如何準(zhǔn)確的稀釋樣本,？
閱讀：702 發(fā)布時間：2024-10-23一個準(zhǔn)確的ELISA檢測實驗,，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒,、造模成功并準(zhǔn)確采集的樣本、可控環(huán)境且嚴(yán)謹(jǐn)實驗操作,，三者缺一不可,。在操作過程中，經(jīng)常遇到樣本稀釋問題,，需要進(jìn)行樣本稀釋,。
一、在ELISA實驗過程中,，超過試劑盒檢測范圍的,，樣本值高的可能情況
1、樣本中待測物含量過高,。一些高豐度蛋白來說,，比如免疫球蛋白、脂聯(lián)素,、C肽,、載脂蛋白等，在樣本中本身含量就很高,，有的達(dá)到mg/mL濃度,。
2、一些受誘導(dǎo)表達(dá)的細(xì)胞上清中,，大量表達(dá),，比如小鼠細(xì)胞誘導(dǎo)后，大量表達(dá)腫瘤壞死因子α（TNFα）,，小鼠胰島細(xì)胞受誘導(dǎo)后,，大量表達(dá)胰島素（INS）,。
3、在一些感染性疾病中,，大量表達(dá),，比如乙肝表面抗原、C反應(yīng)蛋白,。
4、疫苗原性研究時,，注射疫苗的小鼠,，會產(chǎn)生大量針對疫苗的抗體。
5,、一些被濃縮的樣品,，比如重組蛋白的產(chǎn)物，單克隆抗體純品等,。
二.在ELISA檢測過程中,，經(jīng)常會遇到這樣的問題：樣本測定OD值超過標(biāo)曲最高點OD值，造成測定數(shù)據(jù)無法直接使用,。樣本必須進(jìn)行稀釋,，如何確定測定樣本的稀釋倍數(shù)？ 樣本稀釋容易犯的錯誤有哪些,？
1,、稀釋不足。稀釋倍數(shù)不足時,，容易導(dǎo)致最終結(jié)果偏小,。
2、過度稀釋,。過度稀釋時,，容易導(dǎo)致最終結(jié)果偏大。
3,、稀釋不夠規(guī)范,，引入很多人為偏差。稀釋不夠規(guī)范,，特別是大比例稀釋時,，人為偏差大大增加。
三,、如何確定測定樣本的稀釋倍數(shù)呢,？樣本稀釋的原則如下：在查詢背景知識，或者通過預(yù)實驗,，確認(rèn)了樣本濃度過高,，需要進(jìn)行稀釋,，就要根據(jù)以下原則，嚴(yán)謹(jǐn)操作和計算,。
1,、稀釋倍數(shù)合理。稀釋后樣本測定的OD值,，要求落在標(biāo)準(zhǔn)品最高值OD值的半量程內(nèi),，假定標(biāo)準(zhǔn)品最高值的OD值是2.4，那么稀釋后的樣本,，OD值接近1.2,，在這個范圍附近，計算的濃度值最為準(zhǔn)確,，以這個結(jié)果乘以稀釋倍數(shù),，得到的樣本濃度最準(zhǔn)確。
2,、稀釋過程規(guī)范,。特別是大倍比的稀釋，最好是梯度稀釋,。比如樣本要稀釋200倍,，就先稀釋10倍，再在10倍稀釋的基礎(chǔ)上,，再進(jìn)行稀釋20倍,，得到200倍。
3,、樣本取樣量不要太小,。在樣本充足的情況下，樣本取樣量不要低于5uL,，越低的取樣量,，在混勻取樣過程中，誤差越大,。
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