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ELISA檢測結(jié)果不理想的原因,？
閱讀：587 發(fā)布時間：2024-5-27ELISA作為經(jīng)典的免疫檢測方法,，看起來很平常,，然而真正做好它并不容易。恒遠專注科研試劑盒的研發(fā)及銷售多年,，涉及分子生物學,、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領(lǐng)域,，滿足您實驗所需,，以實現(xiàn)與客戶的雙贏，完善的庫存及供應體系以及高效穩(wěn)定的專業(yè)技術(shù)，保證產(chǎn)品均能現(xiàn)貨供應,。有哪些方法可以借鑒呢,？恒遠技術(shù)人員總結(jié)了以下幾點：
一、確定您的樣本類型和試劑盒可以兼容
常見樣本類型有血清,，血漿,，細胞培養(yǎng)上清，如果是廠家實驗驗證過的,，可根據(jù)產(chǎn)品說明購買使用,。
注意：血漿制備用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽,、肝素等多種,，相應的血漿性質(zhì)存在差異，需單獨確認兼容性
二,、試劑盒檢測范圍需要匹配樣本中標志物濃度
elisa試劑盒的定量檢測范圍需參考標準曲線,，在標準曲線低和最高濃度區(qū)間內(nèi)屬于線性范圍，其中的值是可信和可定量的,。濃度高于線性范圍的樣品要稀釋到線性范圍內(nèi)來測量,，而濃度低于線性范圍的樣品，其測量值不能用于計算濃度,，只能用做參考,。有一種常見的相關(guān)情況是：健康人樣本中很多標志物的濃度偏低，測量值低于標準曲線低值,。
三,、樣本收集有講究
以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說明書,，但需注意以下要點,。樣本盡量用無菌管收集，避免細菌的酶類和代謝產(chǎn)品對結(jié)果的影響,。采集過程要避免溶血,，因為紅細胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會影響檢測。保存過程中如有沉淀,，應離心后取上清液,。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃,，每次檢測使用一管,，即避免交叉污染和反復凍融，有能保證檢測結(jié)果的平行可比性,。
四,、實驗前要準備好相應試劑
提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境,，這個過程大致需半小時左右。洗液是濃縮液,，如有結(jié)晶析出,，需溶解后再進行稀釋。A,、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液,。為保證蛋白標準品溶液配制質(zhì)量，蛋白標準品為凍干粉,，重溶前需將管子離心,，加入說明書的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻,，至少 15 分鐘,，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存,，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存,。梯度稀釋蛋白標準品時，建議用聚丙烯管（對蛋白吸附力很低）,，每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準確性,。
五,、儀器設備的準備
相關(guān)設備包括移液器、洗板機/搖床和酶標儀,。移液器的準確性對于ELISA實驗結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵,，需要確保定期校準維護。搖床的使用是為了讓反應體系快速達到平衡,，獲得穩(wěn)定,、可重復的結(jié)果。不用搖床對實驗通常的影響是,，OD 值低,，CV 大。酶標儀等設備使用前提前15分鐘開機預熱,。
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