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ELISA實驗之“OD值“,？
閱讀：585 發(fā)布時間：2024-5-10“OD值"這個概念想必做實驗的各位小伙伴們都不陌生,，從判斷提取核酸的質(zhì)量及濃度,，到BCA蛋白定量進行蛋白定量，又或者是ELISA實驗檢測目的蛋白含量,，這些常用的基礎(chǔ)實驗都需要檢測樣品的“OD值",，但是，“OD值"到底是什么,，我們在測量“OD值"的時候又有哪些需要注意的問題,，今天就讓小編給小伙伴們好好說道說道。什么是“OD"值,？
OD全稱optical density,，也就是光密度，也可以稱為吸光度,。吸光度指的是利用物質(zhì)的吸收光譜,，來鑒別物質(zhì)或者測定物質(zhì)的含量，也就是將一束特定波長的光通過被檢測物，被檢測物可以將光吸收掉一部分,，通過吸光度計算被檢測物的濃度,。一般被檢測物濃度越高，吸光度的值就會越高,。實驗中也是利用“OD值"和被檢測物的濃度之間的關(guān)系來根據(jù)吸光度,。
測量“OD值"注意事項：
最需要注意的就是測量時的光波長。吸光度利用的是物質(zhì)吸收光譜,，實際操作中我們需要注意的最關(guān)鍵的也是這一點,，不同物質(zhì)的吸收光譜不同，最大吸收峰的波長也不同,，為了達到好的測量效果,，一般來講，我們需要在待測物質(zhì)的最大吸收波長處來檢測其“OD值",。例如,，核酸在260nm波長處光吸收最大，而蛋白和酚類物質(zhì)則在280nm波長處光吸收最大,；BCA法檢測蛋白含量時,，顯色反應后，溶液由淺綠色變?yōu)樽仙?，此時在560nm處有最大光吸收值,；TMB法顯色的ELISA實驗，在加入終止液后溶液由藍色變?yōu)辄S色,，在450nm處有最大光吸收,。
對于測量得到的待測樣本“OD值"還需要進行換算才可以得到最終的濃度，有很多小伙伴往往在這一步出現(xiàn)錯誤,，功虧一簣,。需要注意的地方也比較簡單，就是根據(jù)對應試劑盒的說明書,，采用推薦的曲線擬合方式進行擬合,，擬合后需要看一下擬合曲線的R2值，約接近1證明曲線擬合度越高,，結(jié)果越可信,。如果R2值較低，則需要檢查是否出現(xiàn)標準品稀釋問題或?qū)嶒灢僮鞒霈F(xiàn)失誤,。
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