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ELISA實(shí)驗(yàn)之“OD值“,？
閱讀：882 發(fā)布時(shí)間：2024-5-10“OD值"這個(gè)概念想必做實(shí)驗(yàn)的各位小伙伴們都不陌生，從判斷提取核酸的質(zhì)量及濃度,，到BCA蛋白定量進(jìn)行蛋白定量,，又或者是ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)目的蛋白含量，這些常用的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)都需要檢測(cè)樣品的“OD值",，但是,，“OD值"到底是什么，我們?cè)跍y(cè)量“OD值"的時(shí)候又有哪些需要注意的問題,，今天就讓小編給小伙伴們好好說道說道,。什么是“OD"值？
OD全稱optical density,，也就是光密度,，也可以稱為吸光度。吸光度指的是利用物質(zhì)的吸收光譜,，來鑒別物質(zhì)或者測(cè)定物質(zhì)的含量,，也就是將一束特定波長的光通過被檢測(cè)物，被檢測(cè)物可以將光吸收掉一部分,，通過吸光度計(jì)算被檢測(cè)物的濃度,。一般被檢測(cè)物濃度越高，吸光度的值就會(huì)越高,。實(shí)驗(yàn)中也是利用“OD值"和被檢測(cè)物的濃度之間的關(guān)系來根據(jù)吸光度,。
測(cè)量“OD值"注意事項(xiàng)：
最需要注意的就是測(cè)量時(shí)的光波長。吸光度利用的是物質(zhì)吸收光譜,，實(shí)際操作中我們需要注意的最關(guān)鍵的也是這一點(diǎn),，不同物質(zhì)的吸收光譜不同，最大吸收峰的波長也不同,，為了達(dá)到好的測(cè)量效果,，一般來講，我們需要在待測(cè)物質(zhì)的最大吸收波長處來檢測(cè)其“OD值",。例如,，核酸在260nm波長處光吸收最大,，而蛋白和酚類物質(zhì)則在280nm波長處光吸收最大；BCA法檢測(cè)蛋白含量時(shí),，顯色反應(yīng)后,，溶液由淺綠色變?yōu)樽仙藭r(shí)在560nm處有最大光吸收值,；TMB法顯色的ELISA實(shí)驗(yàn),，在加入終止液后溶液由藍(lán)色變?yōu)辄S色，在450nm處有最大光吸收,。
對(duì)于測(cè)量得到的待測(cè)樣本“OD值"還需要進(jìn)行換算才可以得到最終的濃度,，有很多小伙伴往往在這一步出現(xiàn)錯(cuò)誤，功虧一簣,。需要注意的地方也比較簡單,，就是根據(jù)對(duì)應(yīng)試劑盒的說明書，采用推薦的曲線擬合方式進(jìn)行擬合,，擬合后需要看一下擬合曲線的R2值,，約接近1證明曲線擬合度越高，結(jié)果越可信,。如果R2值較低,，則需要檢查是否出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)品稀釋問題或?qū)嶒?yàn)操作出現(xiàn)失誤。
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