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恒遠(yuǎn)生物帶大家了解還原酶檢測(cè)需知

閱讀:488          發(fā)布時(shí)間:2024-1-11

能夠還原斐林(H.von Fehling)試劑(本尼迪特試劑)或托倫斯(B.Tollens)試劑的糖稱(chēng)為還原糖,,所有的單糖(除二羥丙酮),不論醛糖,、酮糖都是還原糖,。大部分雙糖也是還原糖,蔗糖例外,。斐林試劑是含Cu2+絡(luò)合物的溶液,,被還原后得到磚紅色Cu2O的沉淀。托倫斯試劑被還原后能生成單質(zhì)銀,,發(fā)生“銀鏡反應(yīng)",。分子結(jié)構(gòu)中含有還原性基團(tuán)(如游離醛基或游離酮基)的糖,叫還原糖,。如葡萄糖,。果糖含有游離的酮基,所以果糖也屬于還原糖,。


一,、還原性質(zhì)


一般情況下,單糖的還原能力主要來(lái)自它的醛基,,如葡萄糖,,而多糖則大多因?yàn)榘肟s醛羥基的存在。還原后,,自己會(huì)變成糖酸,。如葡萄糖就會(huì)變成葡萄糖酸。如該糖是酮糖,,羰基就會(huì)斷裂,,分解成兩個(gè)較小的分子,如果糖,。所有單糖(除二羥丙酮)及大部分二糖(除蔗糖等)在本尼迪克特試驗(yàn)中呈陽(yáng)性反應(yīng),,所以大部分單糖及二糖都具有還原性,。


二,、還原糖直接滴定法原理:


試樣經(jīng)除去蛋白質(zhì)后,以亞甲藍(lán)作指示劑,在加熱條件下滴定標(biāo)定過(guò)的堿性酒石酸銅溶液(已用還原糖標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定),根據(jù)樣品液消耗體積計(jì)算還原糖含量。


三,、還原糖滴定注意事項(xiàng):


1)堿性酒石酸甲,、乙液與還原糖反應(yīng)是定量關(guān)系,它們的多少直接影響測(cè)定結(jié)果的多少,,從而影響檢測(cè)數(shù)據(jù),,所以堿性酒石酸甲、乙液必須精確吸取,,保證每次取樣量一致,。


影響堿性酒石酸銅甲,、乙液吸取誤差的因素:


① 堿性酒石酸銅甲、乙液在吸管中刻度液面的位置要保持一致,。


② 吸管外壁殘留的液體多少會(huì)造成堿性酒石酸甲,、乙液取樣量的誤差,所以要習(xí)慣性的對(duì)吸管外壁的堿性酒石酸甲,、乙液進(jìn)行相同處理,,保證每次外壁殘留液相對(duì)一致,從而減少液體取樣量的誤差,。


③ 堿性酒石酸銅甲,、乙液放入三角瓶的速度保持一致(不可吹),放完后要觀察其殘留在吸管中有多少,,要保證每次殘留一致,。


④ 堿性酒石酸銅甲、乙液的不是很明顯的沉淀(或濃度變化)也會(huì)對(duì)測(cè)定造成波動(dòng),,取堿性酒石酸銅甲液的器具切記不要與堿性物質(zhì)接觸(同時(shí)也要注意防止帶入堿性物質(zhì)于甲液中),,以避免甲液產(chǎn)生沉淀,盛甲液的容器時(shí)間長(zhǎng)了,,內(nèi)壁上也會(huì)殘留固體(硫酸銅),,這些固體顆粒也會(huì)造成檢測(cè)誤差。


2)滴定速度要保持均衡一致,,趁熱以每2秒一滴的速度滴定為好(速度不要受滴定時(shí)間的長(zhǎng)短而改變),。


3)試樣溶液滴定時(shí)要進(jìn)行預(yù)測(cè),正式測(cè)定時(shí)從滴定管滴加比預(yù)測(cè)體積少1ml的試樣溶液至錐形瓶中,,控制在2min中內(nèi)加熱至沸,,保持沸騰以1滴/2s的速度滴定至終點(diǎn)。


4)電爐的溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果也有影響,,所以要保證電爐充分預(yù)熱,,同時(shí)三角瓶在電爐上的放置位置要保持一致。


5)測(cè)定時(shí)液體沸騰后的開(kāi)始滴定的時(shí)間也要保持一致2min內(nèi),,一般等液體充分沸騰后開(kāi)始滴定,。


6)滴定終點(diǎn)的判斷也要保持一致,等液體藍(lán)色剛好褪去為為滴定終點(diǎn),。


7)糖液稀釋及取樣也要注意精確,,注意吸管正確使用方法。


8)滴定過(guò)程中最好佩戴面罩和口罩以防沸騰液體噴濺或是發(fā)生三角爆裂等,。


9)注意滴定管漏液,、變形,滴定管尖-端氣泡等對(duì)檢測(cè)數(shù)值的影響。


10)三角瓶使用后清洗干凈,。


11)滴定開(kāi)始前可以在空白三角瓶和樣品三角瓶?jī)?nèi)加入幾粒小顆粒玻璃珠,,促進(jìn)樣品受熱均勻以及防爆裂。


12)如果溶液中還原糖含量較低,,產(chǎn)生的氧化亞銅便會(huì)較少,,試驗(yàn)后只會(huì)有綠色、混濁的黃色或橙色等,。


13)在酸性環(huán)境中,,Cu2 會(huì)變得較為穩(wěn)定,不容易發(fā)生反應(yīng),,所以不能進(jìn)行試驗(yàn),。


14)醇和醛在這測(cè)試亦會(huì)產(chǎn)生磚紅色沉淀物,因?yàn)閮烧叨季哂性谶@試驗(yàn)中產(chǎn)生作用的官能團(tuán),。


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