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方法：

1,、粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g,、0.020 g 和0.030 g,， 用蒸餾水溶解并定容至100 mL,， 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液,。

2,、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

本實(shí)驗(yàn)以10 mL色拉油為底物，以酶用量,、水解溫度,、反應(yīng)時(shí)間為因素，通過酸價(jià)的測定選定其水解的*條件,。

3,、酸價(jià)的測定

酸價(jià)是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數(shù)， 它用于衡量油脂的水解程度,。實(shí)驗(yàn)中用酸堿滴定法測定水解液的酸價(jià),， 參照文獻(xiàn)[ 3， 4 ]中所使用的方法,， 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液,， 搖勻,， 終止反應(yīng)， 并加入2滴酚酞指示劑,， 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色,， 在30 s內(nèi)不消失為終點(diǎn)， 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(shù)（V ） ,。用同樣的方法測定空白值,， 每個(gè)試驗(yàn)重復(fù)兩次， 以平均值作為測定結(jié)果,。

酸價(jià)按下式計(jì)算：
X = C （V - V0 ） ×40 /M
式中: X —油脂酸價(jià)（mgNaOH /g油）
C—NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（mol/L）
M —試樣的質(zhì)量（ g）
40—NaOH的mmol質(zhì)量（mg/mmol）

4 粗脂肪酶活力的測定

在*水解條件下,， 分別測得粗脂肪酶和標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶水解液的酸價(jià)X1、X2 ,， 根據(jù)公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力,， 其中U1為粗脂肪酶活力， U為標(biāo)準(zhǔn)脂肪酶活力,。

上海恒遠(yuǎn)生物產(chǎn)品目錄參見：http://www.gbdelisa.com