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人白介素ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù),。特異性抗人 IL-1α 單克隆抗體預(yù)包被在高 親和力的酶標(biāo)板上,。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品,、待測樣本和檢測抗體,，經(jīng)過孵育,，樣本中存在的IL-1α與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP),。洗滌后，加入顯色底物TMB,，避光顯色,。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中IL-1α的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),，在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸 光度值,。

人白介素ELISA試劑盒標(biāo)本保存會遇到哪些問題呢，一起來看看吧,！

一,、標(biāo)本保存不當(dāng)

在冰箱中保存過久的標(biāo)本，血清中IgG可聚合成多聚體,、AFP可形成二聚體,，在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深、甚至造成假陽性,；標(biāo)本放置時間過長（如一天以上）,，有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性,。為克服上述干擾,，ELISA測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集；如不能立即測定,，5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4℃,，1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存,；凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮,，分布不均,，應(yīng)充分混合后再測定，但混勻時應(yīng)輕柔,，不可強(qiáng)烈振蕩,。

二、標(biāo)本溶血

由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,，均可因紅細(xì)胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,，在以辣根過氧化物酶為標(biāo)記的ELISA測定中，會導(dǎo)致非特異性顯色,，ELISA試劑盒干擾測定結(jié)果,。為克服上述干擾作用，標(biāo)本采集時必須注意避免溶血,。

三,、標(biāo)本凝集不全

在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液采集后1/2~2h開始凝固,，18~24h凝固,。臨床檢驗(yàn)工作中，有時為了爭取時間快速檢測,，常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清,，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,，易造成假陽性結(jié)果,；這類情況于次日復(fù)查時因已血凝，血清中不再有纖維蛋白原存在,，故復(fù)查結(jié)果變?yōu)殛幮?。為避免上述干擾作用，解決的辦法是血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,，或標(biāo)本采集時用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

四,、標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響

抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用,。

五,、標(biāo)本受細(xì)菌污染

因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，因此,，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣,，亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。

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