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技術(shù)文章

實驗時ELISA競爭法檢測抗-HBe

閱讀:890          發(fā)布時間:2023-5-9

    ELISA方法學(xué)在實驗中運(yùn)用的很廣泛,,5個實驗3個實驗都是用ELISA法檢測的,對于ELISA實驗中也是有多種方法學(xué)可以選擇的,今天我們著重的講解下ELISA實驗中競爭法檢測抗-HBe,,先來了解一下實驗原理吧!


    一,、實驗原理

    用抗-HBe包被固相載體后,,同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg,,若被檢血清中含有抗-HBe,則與包被抗-HBe競爭結(jié)合HBeAg,,被檢標(biāo)本中抗-HBe越多,,HBeAg被結(jié)合越多,而與包被抗-HBe結(jié)合就越少,,加底物后顯色就越淺,;反之越深。

 

    二,、主要試劑與器材

    ELISA試劑盒:內(nèi)含已包被抗-HBe板條,、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液,、陽性和陰性對照血清,,底物溶液(A液、B液),、終止液,、洗滌液。


    三,、結(jié)果分析

    1.P/N≤0.3為陽性,。P/N>0.3為陰性。

    2.P/N=待檢血清OD值/陰性對照OD值,。


    四,、注意事項

    1.試劑置2-4℃保存。取用時應(yīng)先置室溫平衡,。干包被板條須密封防潮,,凍存,取用后余者及時封存,。

    2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度,。

    3.試劑用前應(yīng)搖勻。


    五,、操作步驟

    1.加樣:取出干包板條,,按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應(yīng)孔中,。設(shè)空白對照孔,,除此孔外,每孔加HBeAg50μl,、HRP-抗HBe50μl,,振蕩混勻后,置43℃(或37℃)溫育1h,。

    2.洗滌:甩去孔內(nèi)液體,,用洗滌液注滿各孔,,靜置20s,甩干,。如此重復(fù)洗滌4次,,在吸水紙上拍干,。

    3.顯色:每孔加顯色劑A,、顯色劑B各50μl,振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min,。

    4.終止:每孔加終止液50μl,,振蕩混勻。

    5.酶標(biāo)儀檢測:選用450nm波長,,用空白孔調(diào)零之后測各孔OD值,。


    更多實驗資訊可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司擁有自己的實驗室,,備有專業(yè)的技術(shù)研發(fā)團(tuán)隊,,長期致力于各種生物試劑,細(xì)胞,,血清,,ELISA試劑盒的研發(fā)與銷售,實驗提供免費(fèi)代測服務(wù),,并提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù),,如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢,為您提供專業(yè)的一對一技術(shù)指導(dǎo),。 



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