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實驗時ELISA競爭法檢測抗-HBe
閱讀:890 發(fā)布時間:2023-5-9ELISA方法學(xué)在實驗中運(yùn)用的很廣泛,,5個實驗3個實驗都是用ELISA法檢測的,對于ELISA實驗中也是有多種方法學(xué)可以選擇的,今天我們著重的講解下ELISA實驗中競爭法檢測抗-HBe,,先來了解一下實驗原理吧!
一,、實驗原理
用抗-HBe包被固相載體后,,同時加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg,,若被檢血清中含有抗-HBe,則與包被抗-HBe競爭結(jié)合HBeAg,,被檢標(biāo)本中抗-HBe越多,,HBeAg被結(jié)合越多,而與包被抗-HBe結(jié)合就越少,,加底物后顯色就越淺,;反之越深。
二,、主要試劑與器材
ELISA試劑盒:內(nèi)含已包被抗-HBe板條,、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液,、陽性和陰性對照血清,,底物溶液(A液、B液),、終止液,、洗滌液。
三,、結(jié)果分析
1.P/N≤0.3為陽性,。P/N>0.3為陰性。
2.P/N=待檢血清OD值/陰性對照OD值,。
四,、注意事項
1.試劑置2-4℃保存。取用時應(yīng)先置室溫平衡,。干包被板條須密封防潮,,凍存,取用后余者及時封存,。
2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度,。
3.試劑用前應(yīng)搖勻。
五,、操作步驟
1.加樣:取出干包板條,,按編號順序分別加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清于相應(yīng)孔中,。設(shè)空白對照孔,,除此孔外,每孔加HBeAg50μl,、HRP-抗HBe50μl,,振蕩混勻后,置43℃(或37℃)溫育1h,。
2.洗滌:甩去孔內(nèi)液體,,用洗滌液注滿各孔,,靜置20s,甩干,。如此重復(fù)洗滌4次,,在吸水紙上拍干,。
3.顯色:每孔加顯色劑A,、顯色劑B各50μl,振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min,。
4.終止:每孔加終止液50μl,,振蕩混勻。
5.酶標(biāo)儀檢測:選用450nm波長,,用空白孔調(diào)零之后測各孔OD值,。
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