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    ELISA方法學(xué)在實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用的很廣泛,，5個(gè)實(shí)驗(yàn)3個(gè)實(shí)驗(yàn)都是用ELISA法檢測的,，對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)中也是有多種方法學(xué)可以選擇的，今天我們著重的講解下ELISA實(shí)驗(yàn)中競爭法檢測抗-HBe,，先來了解一下實(shí)驗(yàn)原理吧,！

    一、實(shí)驗(yàn)原理

    用抗-HBe包被固相載體后,，同時(shí)加被檢血清和合適滴度中和試劑HBeAg,，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競爭結(jié)合HBeAg,，被檢標(biāo)本中抗-HBe越多,，HBeAg被結(jié)合越多，而與包被抗-HBe結(jié)合就越少,，加底物后顯色就越淺,；反之越深。

 

    二,、主要試劑與器材

    ELISA試劑盒：內(nèi)含已包被抗-HBe板條,、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液,、陽性和陰性對(duì)照血清,，底物溶液（A液、B液）,、終止液,、洗滌液。

    三,、結(jié)果分析

    1.P/N≤0.3為陽性,。P/N＞0.3為陰性,。

    2.P/N=待檢血清OD值/陰性對(duì)照OD值。

    四,、注意事項(xiàng)

    1.試劑置2-4℃保存,。取用時(shí)應(yīng)先置室溫平衡。干包被板條須密封防潮,，凍存,，取用后余者及時(shí)封存。

    2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃度,。

    3.試劑用前應(yīng)搖勻,。

    五、操作步驟

    1.加樣：取出干包板條,，按編號(hào)順序分別加50μl待檢血清,、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清于相應(yīng)孔中。設(shè)空白對(duì)照孔,，除此孔外,，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl,，振蕩混勻后,，置43℃（或37℃）溫育1h,。

    2.洗滌：甩去孔內(nèi)液體,，用洗滌液注滿各孔，靜置20s,，甩干,。如此重復(fù)洗滌4次，在吸水紙上拍干,。

    3.顯色：每孔加顯色劑A,、顯色劑B各50μl，振蕩混勻后置37℃避光顯色10-15min,。

    4.終止：每孔加終止液50μl,，振蕩混勻。

    5.酶標(biāo)儀檢測：選用450nm波長,，用空白孔調(diào)零之后測各孔OD值,。

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