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ELISA實(shí)驗(yàn)是一個(gè)非常嚴(yán)謹(jǐn),、極其考驗(yàn)操作者技巧和經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)，檢測結(jié)果數(shù)值低,、標(biāo)準(zhǔn)曲線梯度差,、背景值高、變異系數(shù)大等諸多問題也是兵家常事,。有很多客戶向我們咨詢,，ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)總是偏低，不知道是什么問題,。恒遠(yuǎn)生物就為大家總結(jié)一下具體原因,，一起來看看吧！

一,、整體OD值偏低或無信號(hào)：

1.試劑盒組分失活

相應(yīng)對(duì)策：使用新的試劑盒,，按照說明書要求保存試劑盒

2.試劑盒組分未平衡

相應(yīng)對(duì)策：試劑盒每個(gè)組分都需要平衡至室溫后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)

3.試劑混用或混合不充分

相應(yīng)對(duì)策：保證使用試劑盒內(nèi)完整一套試劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，保證溶液充分混合

4.洗液被污染

相應(yīng)對(duì)策：配制新的洗液

5.洗滌液浸泡時(shí)間過久或洗板次數(shù)過多

相應(yīng)對(duì)策：按照說明書的要求進(jìn)行操作

6.孵育時(shí)間不充分

相應(yīng)對(duì)策：保證充足的孵育時(shí)間

7.孵育溫度不穩(wěn)定

相應(yīng)對(duì)策：檢查恒溫箱，確保孵育溫度穩(wěn)定

8.生物su化抗體或HRP酶結(jié)合物不足

相應(yīng)對(duì)策：保證濃縮液取量準(zhǔn)確且稀釋完

9.生物su化抗體或酶結(jié)合物稀釋不正確或步驟顛倒

相應(yīng)對(duì)策：按照說明書的步驟和要求進(jìn)行操作

10. 未加終止液

相應(yīng)對(duì)策：反應(yīng)結(jié)束時(shí),，確保每孔加入終止液終止反應(yīng)

11.終止后未及時(shí)讀板

相應(yīng)對(duì)策：終止液終止反應(yīng)后需要在10min內(nèi)進(jìn)行讀板操作

12.酶標(biāo)儀設(shè)置錯(cuò)誤

相應(yīng)對(duì)策：在酶標(biāo)儀上檢查波長和濾光片設(shè)置

二,、標(biāo)曲線性佳但樣本OD值偏低

1.標(biāo)準(zhǔn)品部分降解

相應(yīng)對(duì)策：按照說明書推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品。開封后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)以高濃度用EP管分裝凍存,，保存于-20℃,，半個(gè)月內(nèi)使用有效。

2.標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶不當(dāng)

相應(yīng)對(duì)策：打開前將標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心,，檢查復(fù)溶后是否有未溶解的物質(zhì)

3.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋不正確

相應(yīng)對(duì)策：按照說明書要求,，保證按正確倍比梯度稀釋

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