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ELISA實(shí)驗(yàn)試劑解析
閱讀：922 發(fā)布時(shí)間：2022-6-21在ELISA實(shí)驗(yàn)中有三個(gè)必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；
（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）,；
（3）酶的底物；
（4）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品（定性測(cè)定中）,，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清（定量測(cè)定中）；
（5）酶聯(lián)物（結(jié)合物）及標(biāo)本的稀釋液,；
（6）洗滌液,；
（7）酶反應(yīng)終止液。
1.免疫吸附劑
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫（2~8℃）干燥的條件下一般可保存6個(gè)月以上,。有些不完整的試盒,，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測(cè)人員需自行包被,。以下簡(jiǎn)述固相載體和包被過(guò)程,。
2.固相載體
固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器，不參與化學(xué)反應(yīng),?？勺鱁LISA中載體的材料很多，常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,，加之它的價(jià)格低廉，所以被普遍采用,。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式。
ELISA載體的形狀主要有三種：微量滴定板,、小珠和小試管,。以微量滴定板為常用，專用于EILSA的產(chǎn)品稱為ELISA板,，上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式,。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè)，有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,，放入座架后,，大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),，并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?，F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè)，包括加樣,、洗滌,、保溫、比色等步驟,，對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利,。聚苯乙烯經(jīng)射線照射后，其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,，應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,，但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,，空白值低,，孔底透明度高，各板之間,、同一板各孔之間,、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,，各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,，因此，每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能,。常用的檢查方法為：以一定濃度的人IgG（一般為10ng/ml）包被ELISA板各孔,，洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體，保溫后洗滌,，加底物顯色,，終止酶反應(yīng)后,，分別測(cè)每孔溶液的吸光度?？刂品磻?yīng)條件,，使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值,。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,，應(yīng)小于10%。
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