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ELISA簡介
酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay) ，簡稱ELISA,，它是實驗室常用的檢測方法,。酶是能夠催化化學(xué)反應(yīng)的特殊蛋白質(zhì)，其催化效力*人造催化劑,，ELISA就是將抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)相結(jié)合而建立的一種新技術(shù),。使用酶去標(biāo)記抗原或抗體以后既不影響抗原抗體反應(yīng)的特異性， 也不改變酶本身的活性,。因此ELISA具有準(zhǔn)確性高,、檢測時間短、價格低廉、判斷結(jié)果有客觀標(biāo)準(zhǔn),、結(jié)果便于記錄和保存等優(yōu)點,，適合于大批標(biāo)本的檢測，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測,、醫(yī)療檢測以及免疫實驗分析等領(lǐng)域,。

ELISA基本原理
1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，并保持器免疫學(xué)活性,。例如：蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與聚苯乙烯表面的疏水基團(tuán)能產(chǎn)生互作用而吸附,。
2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性,；
3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,，由此進(jìn)行定性或定量分析,。

ELISA類別
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體,，根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的情況以及檢測的具體條件,，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法，主要類型有雙抗體夾心法,、間接法,、競爭法、捕獲法等,。

雙抗體夾心法

雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法,，先將已知抗體連接在固相載體上，待測抗原與抗體結(jié)合后再與酶標(biāo)二抗結(jié)合,，形成抗體-待測抗原-酶標(biāo)二抗的復(fù)合物,，復(fù)合物的形成量與待測抗體原成正比。

競爭法 

當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的抗體結(jié)合位點,，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式,。

雙抗原夾心法

雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似,。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測相應(yīng)的抗體,。與間接法測抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體,。

間接法

間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,，故稱為間接法,。

除了以上常見的4種檢測方法外，還有直接法、捕獲包被法,、競爭法（測抗體）,、雙抗原夾心法、ABS-ELISA法等其他方法,。

ELISA試劑盒樣本收集問題分析
1.樣本的收集液體類標(biāo)本: 包括血清,、血漿、尿液,、胸腹水,、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等,。固體類標(biāo)本：植物,，土壤，食品,，藥品等

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA,、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照此實行,。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。
5. 培養(yǎng)細(xì)胞
    
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。6. 組織標(biāo)本
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取1g組織,，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,，仔細(xì)收集上清,。分裝一份待檢測，其余冷凍備用,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。對于植物組織,，不好勻漿的話,，就在液氮中充分研磨