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    常規(guī)用于ELISA實驗的樣本包含血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清,、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預(yù)處理方法存在差異,，合適的樣本預(yù)處理是確保ELISA實驗正確性和準確性的first步,。這里，我們將介紹幾種不同樣本類型的處理方法,。

    一,、血清
    血清是ELISA實驗常用的樣本，其預(yù)處理也十分簡單,。

    使用無熱原無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液樣本,，將試管或離心管在室溫下放置2小時或4℃過夜，分離出血清（建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面,，使血清可以更大程度地分離出來）,。2-8℃下以1000×g離心20分鐘，小心收集上清液（血清）,，立即進行測定,。建議在-20℃或-80℃下將收集的血清分裝保存，避免反復(fù)凍融,。

    在收集血液樣本的過程中應(yīng)避免溶血,，因為紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，這種情況下,，ELISA實驗中將會出現(xiàn)非特異性顯色反應(yīng),，導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確。另外,，樣本還應(yīng)避免細菌污染,，因為細菌可能含有內(nèi)源性HRP，也會導(dǎo)致檢測結(jié)果不準確,。

    二,、血漿
    使用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi),，2-8℃下以1000×g離心15分鐘,，小心收集上清液（血漿）。建議在-20℃或-80℃下將收集的血漿分裝保存,，避免反復(fù)凍融,。樣本應(yīng)避免溶血或高血脂。常見的抗凝劑包括EDTA鈉鹽，肝素鈉,，枸櫞酸鈉等,。檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求,。

    三,、細胞培養(yǎng)上清
    將細胞培養(yǎng)上清液吸入離心管中，在2-8℃下以1000×g離心20分鐘,，除去細胞碎片和雜質(zhì),，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃,，避免反復(fù)凍融,。

    四、細胞提取液
    反復(fù)凍融方法
    1.吸出培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，用胰蛋白酶消化細胞,，然后加入適量的培養(yǎng)基將培養(yǎng)板上的細胞沖洗干凈。懸浮細胞可以省略該步驟,。
    2.將細胞懸浮液收集到離心管中,，在2-8℃下以1000×g離心5分鐘，然后吸去培養(yǎng)基,，用預(yù)冷PBS洗滌細胞3次,。
    3.加入適量的預(yù)冷PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。在6孔培養(yǎng)板（約1×106個細胞）中,，每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞,。
    4.使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反復(fù)凍融，重復(fù)凍融過程數(shù)次,，直至細胞*裂解,。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞。
    5.2-8℃下以1500×g離心10分鐘,，去除細胞碎片,，收集上清液，-20℃或-80℃保存,，避免反復(fù)凍融,。

    五、組織勻漿
    1.用預(yù)冷的PBS（0.01M,，PH7.4）沖洗組織以除去表面殘留的血液或雜質(zhì)（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果）,。
    2.將組織塊稱重，然后切成盡可能小的碎塊,，以便充分勻漿,。
    3.加入適量的預(yù)冷PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）,，用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿,。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。
    4.將勻漿液吸入離心管中，2-8℃下以5000×g離心5分鐘,，收集上清液,，保存至-20℃或-80℃，避免反復(fù)凍融,。

    六,、唾液
    在2-8℃下，4000×g離心10分鐘以去除雜質(zhì),，取上清即可檢測,。建議使用新鮮的唾液樣本檢測。

    七,、尿液
    使用無菌容器收集尿液樣本,。在2-8℃下，1000×g離心15分鐘以去除雜質(zhì),，取上清即可檢測,。

    八、糞便
    將糞便樣本用PBS(0.01M, pH=7.4)重懸,置于冰上振蕩15分鐘,然后在2-8℃,，5000×g離心5分鐘,，取上清即可檢測。

    九,、其他生物體液
    請咨詢技術(shù)支持,。

    樣品注意事項
    1.樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測,，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測)，或-80℃(3個月內(nèi)檢測),，避免反復(fù)凍融,。融化樣本在試驗前請再次離心以去除凍融后可能出現(xiàn)的沉淀物。

    2.試劑盒檢測范圍不等同于樣本的濃度范圍,，如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品Max值,，請根據(jù)實際情況,，做適當倍數(shù)稀釋(建議查閱文獻后先做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù)),。

    3.若所檢樣本不在說明書所列樣本之中,，建議做預(yù)實驗驗證其檢測有效性。

    4.若使用化學(xué)裂解液制備組織勻漿或細胞提取液,，由于引入某些化學(xué)物質(zhì)會導(dǎo)致ELISA測值出現(xiàn)偏差,。樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3，否則會造成假陰性結(jié)果,。