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培養(yǎng)細(xì)胞專題:實驗小白變大神只需要搞清楚這8個點
閱讀：1444 發(fā)布時間：2019-12-3細(xì)胞培養(yǎng)實驗中用量多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基,，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn),。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件,，則會導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。
因此,，在實驗前,，需要熟悉自己所使用的細(xì)胞系，并在實驗中嚴(yán)格遵守所有產(chǎn)品的操作說明,。
在實驗過程中,，作為實驗小白，我們應(yīng)該如何應(yīng)對相關(guān)問題呢,？現(xiàn)在我們一起來看看,！
一、如何挑選適合自己細(xì)胞生長的培養(yǎng)基呢,？
選擇培養(yǎng)基沒有確切的標(biāo)準(zhǔn),，有幾點建議可供參考：
1.建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞首xuan的培養(yǎng)基?？梢圆殚咥TCC或在購買細(xì)胞株時咨詢供應(yīng)商,。
2.根據(jù)細(xì)胞株的特點、實驗的需要來選擇培養(yǎng)基,。如小鼠細(xì)胞株多選RPMI1640,。
3.其他實驗室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞,。
4.也可用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線,、集落形成率等指標(biāo)判斷,，根據(jù)實驗室結(jié)果選擇*培養(yǎng)基，這是客觀的方法,，但比較繁瑣。
二,、如何正確地保存培養(yǎng)基,？
普通的培養(yǎng)基放置在2-8℃冰箱避光保存，若已開封建議3周內(nèi)使用,。未開封的培養(yǎng)基,，一般可穩(wěn)定保存1年。
三,、培養(yǎng)基中酚紅的作用是什么,？導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色變化的原因有哪些,？
酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH值的指示劑：中性時為紅色，酸性時為黃色,，堿性時為紫色,。
1.培養(yǎng)基顏色變黃，原因有：培養(yǎng)基中細(xì)胞代謝產(chǎn)物為酸性,，培養(yǎng)瓶受污染,，細(xì)菌代謝產(chǎn)酸等導(dǎo)致。
2.培養(yǎng)基顏色偏暗紅色,，原因有：培養(yǎng)基保存在4℃冰箱中,，培養(yǎng)基內(nèi)的二氧化碳逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,，而培養(yǎng)基中的酸堿指示劑酚紅會隨著堿性增加而更偏暗紅,。
四、我感覺自己的培養(yǎng)基污染了,，這要怎么進(jìn)行測試呢,？
取0.1ml液體培養(yǎng)基涂布到無菌蛋白凍niu肉膏培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，觀察有無雜菌生長（肉眼即可觀察到）,。
五,、如果我的培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎,？
一旦培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素,，建議避光保存在4℃冰箱且在2周內(nèi)用完。因為一些抗生素和血清的基本成分在解凍后就開始降解了,。
六,、培養(yǎng)基怎么有沉淀了，這是怎么回事,？怎么預(yù)防處理沉淀,？
1.首先判斷培養(yǎng)基是否已經(jīng)污染，其次,，若沉淀為絮狀沉淀則可能是加入血清引起的,，此沉淀對細(xì)胞培養(yǎng)無影響。若沉淀為結(jié)晶,，有可能是因為向培養(yǎng)基里加入的輔助試劑降低了培養(yǎng)基的溶解度,，使一些無機(jī)鹽析出。
2.可應(yīng)用離心,、過濾的方法去除這些沉淀,，盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
七、那我什么情況下可以使用不加酚紅的培養(yǎng)基呢,？
研究表明,，酚紅可以模擬固醇類激素（特別是雌激素）的作用。為避免固醇類反應(yīng),，培養(yǎng)細(xì)胞時,，用不加酚紅的培養(yǎng)基；一些研究人員在做流式細(xì)胞檢測時,，為了避免酚紅干擾檢測,，也使用不加酚紅的培養(yǎng)基。
八,、為什么培養(yǎng)基中會含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,，它們的作用是什么？
L-谷氨酰胺脫掉氨基后可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來源參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝,。丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源,。盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒有葡萄糖的話,，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉,。