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原代細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題解答
閱讀：1682 發(fā)布時(shí)間：2019-10-17原代細(xì)胞培養(yǎng)是建議細(xì)胞系的di一步,，但是有很多小伙伴在原代細(xì)胞上就會(huì)有很多疑惑哦,，主要有以下幾大問(wèn)題,，小編都為大家整理好咯,，搬上你的小板凳,，一起來(lái)看看！
一,、原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別,？
答：根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織di一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞,，這類細(xì)胞直接從組織分離,，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會(huì)逐漸停止生長(zhǎng),。原代細(xì)胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞的大生長(zhǎng)空間,，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。
細(xì)胞系是不斷生長(zhǎng),、分化的細(xì)胞群,，因其經(jīng)過(guò)遺傳改造，致使其具有無(wú)限增長(zhǎng)的潛能,。體外生長(zhǎng)的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研,。
但實(shí)際上，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間,、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后,，細(xì)胞系隨著代數(shù)的增加,，細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。
需要指出的是,，在不同的科研小組中這些術(shù)語(yǔ)的定義會(huì)有所不同,。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群，除非細(xì)胞經(jīng)過(guò)了遺傳改造,。
二,、倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？
答：倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)的翻倍,，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期,。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù),，傳代培養(yǎng)的目的,，是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。
三,、接收到的凍存細(xì)胞該如何處理,？
答：收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存,。此過(guò)程盡量快,，以避免升溫。不要將細(xì)胞儲(chǔ)存在-80℃,，這樣會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可挽回的傷害,。
四、凍存的細(xì)胞該如何開(kāi)始培養(yǎng),？
答：主要分為以下9點(diǎn)：
1.將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,，注意保護(hù)手和眼睛。
2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,，輕輕握住并旋轉(zhuǎn),，直到管內(nèi)物體*融化。
3.將凍存管立即從水浴中拿出,，擦干,，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。
4.用70％的酒精沖洗凍存管,，然后擦去多余酒精,。
5.打開(kāi)蓋子,，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意,，由于凍存管有負(fù)壓，開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出,，這是正?，F(xiàn)象）。
6.用多聚賴氨酸（或參照說(shuō)明書(shū)）包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞,。
7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子,。
8.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中（37℃,，5%CO2，95%空氣）
9.放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基,，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞,。
五、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,，多久更換一次培養(yǎng)基,？
這取決于細(xì)胞生長(zhǎng)的速度。一般而言2-3天更換一次培養(yǎng)基,，許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一,，周三，周五更換培養(yǎng)基,。
注意：凍存細(xì)胞復(fù)蘇后,，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細(xì)胞,。
六,、我能擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存原代正常人類細(xì)胞嗎？
答：這取決于細(xì)胞的類型,。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞,，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長(zhǎng)緩慢的上皮細(xì)胞，不推薦擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存,。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞,、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞,、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等,，可以擴(kuò)增培養(yǎng)和再次凍存。
然而,，需要注意的是再次凍存的過(guò)程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)性能的改變,。
七、培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基,？
答：我們推薦的用量為：T-25培養(yǎng)瓶5ml,，T-75培養(yǎng)瓶15ml，T-150培養(yǎng)瓶30ml,。
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