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胎牛血清實(shí)驗(yàn)中的常見問題
閱讀：1736 發(fā)布時(shí)間：2018-7-171.如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融,。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
長時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,，并避免反復(fù)凍融,。
我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),，請勿超過一個(gè)月,。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。
2.血清中包含絮狀沉淀，它們是什么,，怎么處理?
沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì),。要除去沉淀,，離心血清(400g,，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解,。所以，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,，沉淀會(huì)自然消失,。
3.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,，可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解,。
4.為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細(xì)胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué) 研究,，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。
5.有必要做熱滅活嗎?
實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)”,，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴(kuò)增,。
若非必須，可以不需要做熱處理這一步,。不但節(jié)省時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量!
6.細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴,。
(3) 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2,。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗,。
(5) 掌握細(xì)胞傳代的*時(shí)機(jī),，細(xì)胞切勿生長過老。
血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,，若存放在4℃不可超過一個(gè)月,。解凍血清時(shí) ,，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱，并經(jīng)常搖勻使之溶解,，然后至室溫放置使之升溫,，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍,，顏色加深,，粘稠度也會(huì)增加，血清在解凍和熱滅活后,，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存,，避免反復(fù)凍融。
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