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您的ELISA試劑盒實驗,正在加載中嗎?
閱讀：1747 發(fā)布時間：2018-6-28 近有很多科研朋友們,，在上留言,，說ELISA試劑盒實驗一直進(jìn)行不下去了，那到底是什么原因?qū)е碌哪?？關(guān)注上海恒遠(yuǎn)生物,，讓您zui快了解到科研資訊及科研實驗中那些有趣的事,，今天我給大家?guī)砹薊LISA試劑盒實驗核心步驟,，不知能否得到您的臨幸呢,？
在實驗時，溫度尤為重要
血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,，嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用,。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存,。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,，實驗表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,，產(chǎn)物的生成可達(dá),。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋,，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,，反應(yīng)板不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡,。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確,。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成，采用水浴會造成值偏高或花板,。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),，邊上的值會偏高，建議為了客觀的判斷結(jié)果,，將質(zhì)控放在非邊緣位置,。
相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)
通常采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA），在選擇抗體上,，選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對,；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對,。ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定,。同時，應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋,。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作,。標(biāo)準(zhǔn)品的配制：對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書，注意每批的細(xì)節(jié),。在使用細(xì)胞因子前,，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子,。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。
基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別
基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,，多以大腸桿菌或酵母菌為表達(dá)系統(tǒng),。該類抗原與合成肽相比，分子量大,。合成肽采用化學(xué)方法制備,，由于工藝的局限，合成數(shù)量有限,，只能達(dá)到數(shù)百個氨基酸,；而利用基因工程制備的抗原，分子量更大,。
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