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新客戶一：我用TMB顯色15min后,，加入2M硫酸100ul終止反應(yīng)，然后讀數(shù),。發(fā)現(xiàn)加入陽性血清的OD值不穩(wěn)定,，呈上漲的趨勢，同時(shí)陰性和空白卻穩(wěn)定,，這是什么原因呢,？
上海恒遠(yuǎn)：這說明沒有終止*，降低TMB的用量,。一般情況下是不會漲太多的,。

新客戶二：我用夾心法ELISA測細(xì)胞因子, 檢測標(biāo)準(zhǔn)抗原敏感性只能到 ng/ml水平,我應(yīng)該從那些方面著手來提高敏感性呢?
上海恒遠(yuǎn)：如果單用雙抗體夾心法測細(xì)胞因子，ELISA靈敏度能到1ng上下,，這是方法學(xué)決定的,。有三種方法可以提高靈敏度：一是用發(fā)光法或熒光法，有一種發(fā)光底物可直接替代TMB,，效果明顯,；二是用生物素親和素放大，三是用抗抗體法即包被抗體－細(xì)胞因子－單抗－抗鼠抗體接酶,。zui后一種可以提高靈敏度到0.05ng,。

新客戶三：我看別人洗板時(shí)，用500ml瓶接輸液器直接滴滿,，然后倒掉,，洗板，會不會因?yàn)闈M了滴到其他孔,，造成相互干擾,。3％BSA不能高壓，用蒸餾水稀釋溶解后需要過濾嗎,？我的預(yù)實(shí)驗(yàn)先用方正棋盤法一次摸索一抗,，二抗的濃度，而HRP-Avidin先用他的說明書：1：10000 或1：5000可以嗎,？再次預(yù)實(shí)驗(yàn)則固定一抗，二抗?jié)舛龋琀RP-Aaidin濃度作一系列稀釋,，確定HRP-Aaidin濃度,，對嗎？陽性陰性值怎么確定,？有的用S/P>=2.1,或大于陰性對照OD值的2.1倍,，或陰性對照OD值+-2SD，到底那個(gè)對,？我是雙抗體夾心測抗原,，無標(biāo)準(zhǔn)品。謝謝,！

上海恒遠(yuǎn)：1）如果這樣洗板的話,，只要*次先把孔內(nèi)液體甩去，再加洗滌液即可,，不容易互相干擾的,。zui后所有孔全部加滿后，放置30-60秒再甩去,，這樣洗滌的更*,。
2）BSA溶解后基本不用過濾，除非您的BSA質(zhì)量不好,。
3）沒有標(biāo)準(zhǔn)品,，那您有沒有一些基本的標(biāo)本，或者自己用純化抗原稀釋的質(zhì)控品,。您必須先對您的試劑定一個(gè)要求,，比如說您希望將該抗原 1ng/ml測到0.2，那您就自制一個(gè)質(zhì)控品,，2ng/ml或5ng/ml都行,，對應(yīng)當(dāng)OD就是0.4或1.0。陰性就用您被測的陰性血清,。用質(zhì)控品和陰性血清來摸索濃度,，盡量把陽性質(zhì)控品做高，陰性血清值做低,。您摸濃度的過程基本可以,，可以試試。
4）臨界值的制定方法有很多,，一般市面上定為大于陰性對照OD值的2.1倍的其實(shí)都是定值：0.105,。因?yàn)槿绻幮詫φ招∮?.05的話按0.05計(jì)算。也有陰性對照加定值的（可以加0.1也可以加0.2）,，還有用陽性對照乘以定值的,。這些都可以，關(guān)鍵看您的系統(tǒng)做陰性血清可以達(dá)到多少的值，和您的zui低靈敏度的值可以到多少,。

 

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