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本周焦點(diǎn):簡述ELISA試劑盒固相抗結(jié)合原理

   已包被抗原或抗體的固相載體在低溫并且干燥的條件下，一般可以保存6個月,，而有些不完整的試盒,，僅供應(yīng)包被用抗原或抗體，檢測人員需自行包被,。

  在ELISA測定過程中作為吸附劑和容器,，不參與化學(xué)反應(yīng)?？勺鱁LISA試劑盒中載體的材料很多,，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學(xué)活性,，加之它的價格低廉，所以被普遍采用,。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式。

   在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,。ELISA試劑盒抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為溫育,，有人稱之為孵育,，在ELISA中似不恰當(dāng)。

   加入板孔中的標(biāo)本,，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會,，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn),。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時間的溫育。

   從理論來說,，溫育采用的溫度有43℃,、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等,。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,，實(shí)驗(yàn)表明,，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時，產(chǎn)物的生成可達(dá),。

 

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