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本周焦點(diǎn):簡(jiǎn)述ELISA試劑盒固相抗結(jié)合原理
閱讀:1266 發(fā)布時(shí)間:2017-5-10本周焦點(diǎn):簡(jiǎn)述ELISA試劑盒固相抗結(jié)合原理
已包被抗原或抗體的固相載體在低溫并且干燥的條件下,,一般可以保存6個(gè)月,而有些不完整的試盒,,僅供應(yīng)包被用抗原或抗體,,檢測(cè)人員需自行包被。
在ELISA測(cè)定過程中作為吸附劑和容器,,不參與化學(xué)反應(yīng),。可作ELISA試劑盒中載體的材料很多,,zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,,加之它的價(jià)格低廉,,所以被普遍采用。聚苯乙烯為塑料,,可制成各種形式,。
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng),即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后,。ELISA試劑盒抗原抗體反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間,,這一保溫過程稱為溫育,有人稱之為孵育,,在ELISA中似不恰當(dāng),。
加入板孔中的標(biāo)本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì),,只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸,。這是一個(gè)逐步平衡的過程,因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn),。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此,。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。
從理論來(lái)說(shuō),,溫育采用的溫度有43℃,、37℃,、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度,,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度,。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí),實(shí)驗(yàn)表明,,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),,產(chǎn)物的生成可達(dá)。
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