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急!如何尋求讓ELISA系統(tǒng)更穩(wěn)定的方法
閱讀:1324 發(fā)布時間:2017-4-19ELISA檢測系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研出產(chǎn)中zui為敏捷的技術(shù)手段,??墒窃谛吕鲜植倏v過程中老是會泛起或大或小的題目,例如花板,,假陽性,,全顯色,全部顯色,,顯色比空缺還低,。
恒遠生物研究人員一直在尋求讓ELISA試劑盒實驗,ELISA系統(tǒng)更穩(wěn)定的方法,。讓我們的客戶實驗更加方便,,減少更多操作中遇到的困擾。
常用封鎖劑有:0.05%-0.5%的bsa,;10%的小牛血清或1%明膠,;脫脂奶粉,比較價廉,,可以高濃度使用(5%-10%),;還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,,看一下*可不可以應(yīng)用到自己試驗當(dāng)中去,。但*選用什么,要依據(jù)試驗詳細來實踐,。應(yīng)留意以下原理:因為蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的作用,這種物理吸附長短特異性的,,受蛋白質(zhì)的分子量,、等電點、濃度等的影響,,大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體表面,。小分子必需依賴和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上,。有的包被原可能不是蛋白,,對于生物素和脂類物質(zhì)或小分子物質(zhì)我們要事先對其改造再加以包被,親和素生物素:先親和素先包被載體,,加入生物素化的dna,,這種包被方法平均、牢固,,已擴大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定,。常用的包被液除了剛才提到的ph9.6碳酸鹽緩沖液,還有ph7.2的磷酸鹽緩沖液和ph7-8的tris-hcl緩沖液等等,。
包被原的性質(zhì)很重要,,蛋白濃度,是否降解,,這關(guān)系到您做出的抗體可不可以被其識別,,所以保留抗原很重要,我做重組蛋白時,,師兄都嚴(yán)格警告我一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理,。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附,。但有時因為試驗的需要,,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
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