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上海恒遠生物近期總結(jié)免疫組化實驗中得出：經(jīng)甲醛固定的部分組織細胞，因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇,，使免疫組化標記敏感性明顯降低,，因此在染色前，有些抗原需進行修復(fù)或暴露,。

抗原修復(fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法,。化學(xué)方法是以酶消化方法,，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶,，配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱,、微波處理和高壓加熱,。在選用這三種方法時，浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH,、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復(fù)效果,。

1、pH的應(yīng)用范圍及選擇

抗原修復(fù)液的pH非常重要,，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要,，同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強，但*pH范圍為6.0-10.0,。目前大家*的的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液,。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效，而對固定很長時間舊的存檔組織,，酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液,。

2,、抗原修復(fù)時應(yīng)選擇*溫度

70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì),，溫度必須達到92℃以上方能使其變性,。研究結(jié)果顯示，溫度為92-98℃是合適的,，95℃效果,。

3、抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律,，否則效果不好或達不到抗原修復(fù)的目的

抗原修復(fù)持續(xù)時間過后,，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，不能為了爭取時間,，強行用冰塊或冷水使其降溫,。這是因為當(dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結(jié)，要有一個自然環(huán)境讓其自然放松下來,，隨著溫度的降低,，它們會慢慢地恢復(fù)原來的形態(tài)和構(gòu)型。

4,、盡量使用足量的抗原修復(fù)液

應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體,，一定要充足，防止切片干涸,。應(yīng)用大量的抗原修復(fù)液時,，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時間,，增加切片受微波輻射的量，對抗原修復(fù)將達到*,。

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