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ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何擬合,?
閱讀:5636 發(fā)布時(shí)間:2016-8-23
許多試劑檢測(cè)都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題,標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,,甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗,,那么ELISA的標(biāo)準(zhǔn)曲線如何擬合?,?
一般情況按照說明書推薦方法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線,。標(biāo)準(zhǔn)曲線可以由酶標(biāo)儀附帶軟件自動(dòng)生成,也可手動(dòng)制作。標(biāo)準(zhǔn)曲線呈“S”形曲線,,兩端趨于水平,,中間趨于線性,中間部分為較佳的檢測(cè)范圍,。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品的量超過與包被抗體結(jié)合的量,,此時(shí)標(biāo)準(zhǔn)品已飽和,再增加標(biāo)準(zhǔn)品的量,,其OD值不再變化,,故當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品達(dá)到一定濃度后,曲線就趨于水平,。一般廠商給出的濃度范圍落在中間線性范圍,,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,可以測(cè)出樣本的濃度,。按照科學(xué)分析方法,,如果存在“奇異點(diǎn)”或者“污點(diǎn)”,直接采用線性分析不是很好,,要對(duì)擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的幾個(gè)點(diǎn)進(jìn)行取舍,,同時(shí)也可改用雙對(duì)數(shù)直線擬合或者四因素曲線擬合。
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),,OD值為橫坐標(biāo)(對(duì)數(shù)坐標(biāo)),,在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。推薦使用專業(yè)制作曲線軟件進(jìn)行分析,,如curve expert 1.3,,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,再乘以稀釋倍數(shù),;或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,,再乘以稀釋倍數(shù),,即為樣品的實(shí)際濃度。
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