詳細(xì)介紹
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英文名稱(chēng):Mouse interferon-inducible protein 10,IP-10 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
品牌:RD/類(lèi)別:ELISA試劑盒/人的ELISA檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品特點(diǎn):For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù).
上海恒遠(yuǎn)供應(yīng)“小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10 ”備有現(xiàn)貨,有需要的請(qǐng)及時(shí)垂詢(xún)
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業(yè) 務(wù)
操作步驟
用于檢測(cè)未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,,4℃過(guò)夜,。
2、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照于反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀(guān)察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O?D值:在ELISA檢測(cè)儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性,。
ELISA原理實(shí)驗(yàn)條件和技術(shù)要點(diǎn):
在應(yīng)用ELISA時(shí),,首先要清楚下面內(nèi)容:1,是檢測(cè)抗體還是抗原,?2,,檢測(cè)的結(jié)果是定性還是定量?3,,是否需要檢測(cè)特異抗體的類(lèi)型,?4,所用抗體/單克隆抗體的親和力怎樣,?
(1)檢測(cè)抗原 zui常用于檢測(cè)抗原的方法是非競(jìng)爭(zhēng)性的雙抗體夾心法,,其次是競(jìng)爭(zhēng)法。但競(jìng)爭(zhēng)法在具體實(shí)驗(yàn)中有些困難,,特別是檢測(cè)微生物的抗原,,因?yàn)樾枰獦?biāo)記抗原,這對(duì)于某些抗原是很難做到的,,甚至是不可能的,。另外在競(jìng)爭(zhēng)法中,酶標(biāo)記的抗原與標(biāo)本直接混合在一起,,許多標(biāo)本中含有酶抑制劑或蛋白A樣物質(zhì),,可影響ELISA的結(jié)果。
(2)檢測(cè)抗體 檢測(cè)抗體種類(lèi)常用的方法是檢測(cè)抗體種類(lèi)的捕獲法,,這個(gè)方法常用于檢測(cè)特異性IgG,、IgA和IgM.。這個(gè)方法的*步是捕獲所需要檢測(cè)的一個(gè)種類(lèi)的抗體,,接下來(lái)是檢測(cè)捕獲的抗體是否是特異性抗原的抗體,。間接ELISA在檢測(cè)IgG時(shí)比較簡(jiǎn)單,,但不適用于檢測(cè)其他種類(lèi)的抗體,因?yàn)檠逯腥绻刑禺怚gG存在將與IgM或IgA等競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原,。