詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽
英文名稱:Rat Carboxyterminal propeptide of type Ⅰ procollagen,PⅠCP ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬,、犬、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清,、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿,、組織液、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD分裝,,原裝、美國RB原裝
保存條件:2-8℃
提供ELISA代做實(shí)驗(yàn) 在我司購買試劑盒提供免費(fèi)代測
實(shí)驗(yàn)方法:
酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測原理:
采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法
注意事項(xiàng)
1. 正式試驗(yàn)時,,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗(yàn)條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,。有時本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,,其中包括:
?。?) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時,。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,,在其它試驗(yàn)條件相同時,,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml,。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
?。?) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入。