詳細介紹
產(chǎn)品名稱:大鼠主要組織相容性復合體Ⅲ類
英文名稱:Rat major histocompatibility complexⅢ,MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人、大小鼠,、豚鼠,、兔子、豬,、犬,、牛、羊…
標本齊全:血清,、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液、關節(jié)液,、胸腔溢液等…
經(jīng)營品牌:美國RD分裝,,原裝、美國RB原裝
保存條件:2-8℃
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實驗方法:
酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
檢測原理:
采用雙抗體夾心 ABC-ELISA 法
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,,4℃過夜。次日,,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,,置37℃孵育1小時,。然后洗滌。(同時做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,4℃過夜,。
2,、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白,、陰性及陽性孔對照于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6。
3. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結果:反應孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。