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上海恒遠生物公司提供免費代測服務(wù),,產(chǎn)品僅供科研,。
產(chǎn)品名稱:大鼠凝血酶抗凝血酶復合物
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
主要組成成分:試劑盒
性狀:液體
適應(yīng)癥:科研
貯藏:2-8℃
注意事項
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清,、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值,。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
?。?) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度,。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入。
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