詳細(xì)介紹
本公司對(duì)所售出的產(chǎn)品提供售前售后服務(wù):
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上海恒遠(yuǎn)生物公司提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),,產(chǎn)品僅供科研,。
產(chǎn)品名稱:大鼠凝血因子Ⅹ
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
主要組成成分:試劑盒
性狀:液體
適應(yīng)癥:科研
貯藏:2-8℃
注意事項(xiàng)
1. 正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2. 在ELISA中,,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值z(mì)ui大而蛋白量zui少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
?。?) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進(jìn)行初步效價(jià)的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。
?。?) 酶的底物及供氫體的選擇:對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應(yīng)注意防護(hù),。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體,。底物作用一段時(shí)間后,,應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時(shí)間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入,。
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