詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:大鼠環(huán)孢素A
英文名稱:Rat Cyclosporine A,CsA ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
檢測范圍:請咨詢我司業(yè)務(wù)人員
保存條件:2-8℃。
有效期:6個(gè)月
運(yùn)輸條件低溫運(yùn)輸,,用干冰或者冰袋低溫運(yùn)輸,。
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃過夜,。次日,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘。(簡稱洗滌,,下同),。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌,。(同時(shí)做空白孔,,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml,。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌,。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”,、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,,每孔加0.1ml,4℃過夜,。
2,、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌,。同時(shí)做空白,、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5,、6,。
3. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強(qiáng),,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,,以“+”,、“-”號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性。