詳細介紹
科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實驗代測服務.
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產品名稱:大鼠Smad7
英文名稱:Rat Mothers against decapentaplegic homolog 7,Smad7 ELISA KIT
產品規(guī)格:96人份/48人份
各種種屬:人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬,、犬、牛,、羊…
標本齊全:血清,、血漿、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿,、組織液、關節(jié)液,、胸腔溢液等…
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃,。
2.有效期:6個月
運輸條件低溫運輸,用干冰或者冰袋低溫運輸,。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,,發(fā)展十分迅速,,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域。
操作步驟
方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,,4℃過夜。次日,,棄去孔內溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘,。(簡稱洗滌,,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),。
3. 加酶標抗體:于各反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。
方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
1,、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,,4℃過夜,。
2、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應孔中,,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
3. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,,37℃10~30分鐘,。
4. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
5. 結果判定:可于白色背景上,,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,,依據所呈顏色的深淺,,以“+”、“-”號表示,。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,,以空白對照孔調零后測各孔O?D值,,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性,。