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大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶    Rat Phosphorylated acetyl-CoA catboxylase,pACCase ELISA KIT 

產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份     保存條件：2-8℃
產(chǎn)地：美國(guó)
實(shí)驗(yàn)方法：
酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
檢測(cè)原理：
采用雙抗體夾心ABC-ELISA原理
操作步驟
用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,，4℃過(guò)夜。次日,，棄去孔內(nèi)溶液,，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘,。（簡(jiǎn)稱洗滌,，下同）。
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時(shí),。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔,，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）,。
　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時(shí),，洗滌。
　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘,。
　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺,，以“+”、“-”號(hào)表示,。也可測(cè)O?D值：在ELISA檢測(cè)儀上,，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O?D值,，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,，即為陽(yáng)性。