化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中鵝圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）,。用純化的抗原包被微孔板,，
制成固相抗原，與樣品中圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）溫育后,，加入生物素標(biāo)記的抗 IgG 抗體,，
再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合，形成免疫復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在
HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)
下測(cè)定吸光度（OD 值）,，與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中鵝圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）
的存在與否,。
標(biāo)本要求
1．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔,、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔,、空白對(duì)照 1
孔
2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照 50μl,。然后在待測(cè)樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻,，37℃溫育 45 分鐘,。
3. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復(fù) 4 次,，拍干。
5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體 50μl,。37℃溫育 30 分
鐘
6. 洗滌：操作同 4,。
7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入 50μl 的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育 30
分鐘,。
8. 洗滌：操作同 4,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
結(jié)果判定：
試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）陰性
陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）陽(yáng)性
注意事項(xiàng)
1．操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
4． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
5．底物請(qǐng)避光保存。
6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),，參考波長(zhǎng)為 630nm
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸,，使用時(shí)必須
注意安全。
規(guī)格：
96 人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個(gè)月
化工儀器網(wǎng)