上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司專業(yè)代理美國進(jìn)口原裝,、分裝ELISA試劑盒，種屬標(biāo)本齊全,，待檢樣本可以是體液,，血清，血漿,，細(xì)胞培養(yǎng)上清液,，尿液，組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。本公司提供免費代測服務(wù),，咨詢“人未磷酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1"的詳細(xì)說明書。

產(chǎn)品名稱：人未磷酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1    
英文名稱：Human Non-Phosphorylated Insulin-like growth factor binding protein 1 ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格：96人份/48人份  
檢測范圍：請咨詢我司業(yè)務(wù)人員
保存條件：2-8℃,。
有效期：6個月
運輸條件低溫運輸,，用干冰或者冰袋低溫運輸。
 ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱,。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù),。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速,，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域,。 　　
原理
　　ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù),。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后,，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物,，從而保證試驗結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。在實際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計,，具體的方法步驟可有多種,。即:用于檢測抗體的間接法（圖a）,、用于檢測抗原的雙抗體夾心法（圖b）以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。比較常用的是ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法,。 　　
操作步驟
     方法一　用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg／ml,。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜,。次日,，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。
　　2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,，置37℃孵育1小時。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。
　　3.　加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃孵育0.5～1小時，洗滌,。
　　4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。
　　5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
　　6.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
　　方法二　用于檢測未知抗體的間接法：　　　
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml,，每孔加0.1ml,，4℃過夜,。
2、次日洗滌3次,。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應(yīng)孔中,，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml,，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW（超純水）洗滌,。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4,、5、6,。
3.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃10～30分鐘。
4.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。
5.　結(jié)果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng),，陰性反應(yīng)為無色或極淺,，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測O?D值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
試劑器材
　　1.　試劑
　　（1）　包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
　　　　NaCO31.59克　NaHCO3　 2.93克　　加蒸餾水至1000ml　　
    （2）　洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M　KH2PO4 0.2克　Na2HPO4?12H2O　2.9克　NaCl  8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05％ 0.5ml 加蒸餾水至1000ml
　?。?）　稀釋液:牛血清白蛋白（BSA） 0.1克　加洗滌緩沖液至100ml　或以羊血清,、兔血清等 血清與洗滌液配成5～10％使用。
　?。?）　終止液（2M H2SO4）：蒸餾水178.3ml,，逐滴加入濃硫酸（98％）21.7ml。
　?。?）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:0.2M Na2HPO4（28.4克／L） 25.7ml　0.1M 檸檬酸（19.2克／L） 24.3ml　加蒸餾水50ml,。
　　（6）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:TMB（10mg／5ml無水乙醇） 0.5ml底物緩沖液（PH5.5） 10ml0.75％H2O2　32μl
　　（7）　ABTS使用液:ABTS　0.5mg　底物緩沖液（PH5.5） 1ml　3％H2O2　2μl
　?。?）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體,。
　?。?）　正常人血清和陽性對照血清。
　　2.　器材:
　?。?）　聚苯乙烯塑料板（簡稱酶標(biāo)板）40孔或96孔,，ELISA檢測儀，50μl及100μl加樣器,，塑料滴頭,，小毛巾，洗滌瓶,。
　?。?）　小燒杯、玻璃棒,、試管,、吸管和量筒等。
　?。?）　4℃冰箱,，37℃孵育箱。
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